| 致谢 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 志贺菌研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1.1 志贺菌概况 | 第10-11页 |
| 1.1.2 志贺菌流行病学 | 第11-12页 |
| 1.1.3 志贺菌的毒力基因 | 第12-14页 |
| 1.1.4 志贺菌的致病机制 | 第14-15页 |
| 1.1.5 志贺菌IpaC蛋白 | 第15页 |
| 1.2 蛋白质相互作用的研究 | 第15-19页 |
| 1.2.1 噬菌体展示技术 | 第16页 |
| 1.2.2 酵母双杂交系统 | 第16-17页 |
| 1.2.3 串联亲和纯化技术 | 第17-18页 |
| 1.2.4 免疫共沉淀技术 | 第18页 |
| 1.2.5 GSTpull-down技术 | 第18-19页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 鸡源志贺菌IpaC基因原核表达载体的构建与表达 | 第20-36页 |
| 引言 | 第20页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1.1 菌株、质粒与宿主菌 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基及常用溶液的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.5 重组表达质粒pGEX-4T-1-IpaC的构建与鉴定 | 第23-26页 |
| 2.1.6 重组表达质粒pGEX-4T-1-IpaC在E.coliBL21(DE3)中的诱导与表达 | 第26-27页 |
| 2.1.7 融合蛋白GST-IpaC表达条件的优化 | 第27-28页 |
| 2.1.8 融合蛋白GST-IpaC及空载体GST蛋白的纯化 | 第28页 |
| 2.1.9 诱导表达产物的Westernblot分析 | 第28-29页 |
| 2.2 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.2.1 IpaC目的基因的PCR电泳结果 | 第29页 |
| 2.2.2 重组质粒pGEX-4T-1-IpaC的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.3 融合蛋白GST-IpaC蛋白的表达与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.4 融合蛋白GST-IpaC表达条件的优化 | 第31-32页 |
| 2.2.5 融合蛋白GST-IpaC及空载体GST蛋白的纯化结果 | 第32-33页 |
| 2.2.6 诱导表达产物的Westernblot鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第34-36页 |
| 3 鸡肠上皮细胞的培养及膜蛋白的提取 | 第36-44页 |
| 引言 | 第36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-39页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第36页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第36-37页 |
| 3.1.5 鸡肠上皮原代细胞的培养 | 第37-38页 |
| 3.1.6 鸡肠上皮细胞的鉴定 | 第38页 |
| 3.1.7 鸡肠上皮细胞膜蛋白的提取及浓度测定 | 第38-39页 |
| 3.1.8 鸡肠上皮细胞膜蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第39页 |
| 3.1.9 鸡肠上皮细胞膜蛋白的Westernblot鉴定 | 第39页 |
| 3.2 结果与分析 | 第39-41页 |
| 3.2.1 倒置显微镜下观察酶消化法分离的肠隐窝单位及细胞的生长状态 | 第39页 |
| 3.2.2 碱性磷酸酶染色法鉴定结果 | 第39-40页 |
| 3.2.3 鸡肠上皮细胞膜蛋白的提取及浓度测定结果 | 第40页 |
| 3.2.4 鸡肠上皮细胞膜蛋白的SDS-PAGE电泳结果 | 第40-41页 |
| 3.2.5 鸡肠上皮细胞膜蛋白的Westernblot鉴定 | 第41页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第41-44页 |
| 4 GSTpull-down技术筛选鸡源志贺菌IpaC蛋白的鸡肠上皮细胞膜受体 | 第44-51页 |
| 引言 | 第44页 |
| 4.1 材料与方法 | 第44-45页 |
| 4.1.1 试验所需蛋白 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第44页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第44页 |
| 4.1.5 GSTpull-down技术筛选鸡肠上皮细胞膜蛋白中的IpaC受体 | 第44-45页 |
| 4.1.6 GSTpull-down产物的SDS-PAGE电泳 | 第45页 |
| 4.1.7 GSTpull-down产物的Westernblot检测 | 第45页 |
| 4.1.8 GSTpull-down产物的质谱分析 | 第45页 |
| 4.2 结果与分析 | 第45-47页 |
| 4.2.1 GSTpull-down产物的SDS-PAGE电泳结果 | 第45-46页 |
| 4.2.2 GSTpull-down产物的Westernblot检测结果 | 第46-47页 |
| 4.2.3 GSTpull-down产物的质谱分析结果 | 第47页 |
| 4.3 结论与讨论 | 第47-51页 |
| 全文总结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-61页 |
| ABSTRACT | 第61-62页 |
