| 中文摘要 | 第8-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 英文缩略词 | 第17-19页 |
| 前言 | 第19-22页 |
| 第一部分 通腑养髓方对高铜诱导的SH-SY5Y细胞自噬效应的影响 | 第22-46页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第22-24页 |
| 1.1 细胞 | 第22页 |
| 1.2 药物 | 第22页 |
| 1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第22-23页 |
| 1.5 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.1 中药通腑养髓方和丁苯酞的制备 | 第24页 |
| 2.2 含药血清制备及保存 | 第24页 |
| 2.3 细胞复苏 | 第24-25页 |
| 2.4 细胞培养和传代 | 第25页 |
| 2.5 细胞计数 | 第25页 |
| 2.6 实验分组及药物处理 | 第25页 |
| 2.7 维生素A酸对SH-SY5Y细胞形态的影响 | 第25-26页 |
| 2.8 CuSO4造模浓度的筛选 | 第26页 |
| 2.9 含药血清浓度和时间筛选 | 第26页 |
| 2.10 乳酸脱氢酶(LDH)活性检测 | 第26-27页 |
| 2.11 透射电镜观察SH-SY5Y细胞自噬 | 第27-28页 |
| 2.12 流式细胞仪检测细胞内ROS的释放 | 第28页 |
| 2.13 流式细胞仪检测线粒体膜电位 | 第28页 |
| 2.14 AO/EB染色 | 第28-29页 |
| 2.15 MDC染色 | 第29页 |
| 2.16 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内Cyt-c的表达 | 第29页 |
| 2.17 蛋白样品制备 | 第29-30页 |
| 2.18 蛋白含量的测定 | 第30页 |
| 2.19 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第30-32页 |
| 2.20 统计学处理 | 第32页 |
| 3 实验结果 | 第32-41页 |
| 3.1 维生素A酸对SH-SY5Y细胞的影响 | 第32-33页 |
| 3.2 CuSO4造模浓度的筛选 | 第33-34页 |
| 3.3 含药血清作用浓度与时间筛选 | 第34-35页 |
| 3.4 LDH试剂盒检测SH-SY5Y细胞漏出率 | 第35页 |
| 3.5 流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞内ROS释放量 | 第35-36页 |
| 3.6 流式细胞仪检测线粒体膜电位 | 第36-37页 |
| 3.7 AO/EB染色检测 | 第37-38页 |
| 3.8 MDC染色检测 | 第38-39页 |
| 3.9 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内Cyt-c的表达 | 第39-40页 |
| 3.10 透射电镜观察SH-SY5Y细胞自噬体的形成 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-45页 |
| 4.1 脑型WD的中医病因病机及治疗 | 第41-43页 |
| 4.2 通腑养髓方对高铜诱导的SH-SY5Y细胞的保护效应 | 第43-44页 |
| 4.3 通腑养髓方对高铜诱导SH-SY5Y细胞自噬效应的影响 | 第44-45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 第二部分 通腑养髓方对LKB1-AMPK自噬信号通路的调控作用研究 | 第46-71页 |
| 1 实验材料和仪器 | 第46-48页 |
| 1.1 细胞 | 第46页 |
| 1.2 药物 | 第46页 |
| 1.3 主要试剂 | 第46-47页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第47页 |
| 1.5 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2 实验方法 | 第48-51页 |
| 2.1 细胞复苏、培养和细胞计数 | 第48页 |
| 2.2 实验分组及药物处理 | 第48页 |
| 2.3 蛋白样品制备、蛋白含量的测定、SDS-PAGE凝胶电泳 | 第48页 |
| 2.4 RT-qPCR法检测SH-SY5Y细胞LKB1-AMPK信号通路相关基因的表达 | 第48-50页 |
| 2.5 统计学处理 | 第50-51页 |
| 3 实验结果 | 第51-65页 |
| 3.1 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞LKB1-AMPK信号通路相关蛋白的表达 | 第51-59页 |
| 3.1.1 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内P27蛋白的表达 | 第51页 |
| 3.1.2 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内ULK1蛋白的表达 | 第51-52页 |
| 3.1.3 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内AMPK蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 3.1.4 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内LC3A/B蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 3.1.5 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内mTOR蛋白的表达 | 第54-55页 |
| 3.1.6 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内TSC2蛋白的表达 | 第55-56页 |
| 3.1.7 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内p-ULK蛋白的表达 | 第56-57页 |
| 3.1.8 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内p-AMPK蛋白的表达 | 第57-58页 |
| 3.1.9 Westernblot法检测SH-SY5Y细胞内LKB1蛋白的表达 | 第58-59页 |
| 3.2 Rt-PCR法检测SH-SY5Y细胞内LKB1-AMPK信号通路相关基因的表达 | 第59-65页 |
| 3.2.1 Rt-PCR法检测SH-SY5Y细胞内ULK1基因的表达 | 第59-60页 |
| 3.2.2 Rt-PCR法检测SH-SY5Y细胞内P27基因的表达 | 第60-61页 |
| 3.2.3 Rt-PCR法检测SH-SY5Y细胞内AMPK基因的表达 | 第61-62页 |
| 3.2.4 Rt-PCR法检测SH-SY5Y细胞内LKB1基因的表达 | 第62-63页 |
| 3.2.5 Rt-PCR法检测SH-SY5Y细胞内mTOR基因的表达 | 第63-64页 |
| 3.2.6 Rt-PCR法检测SH-SY5Y细胞内TSC2基因的表达 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-71页 |
| 4.1 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内LKB1-AMP信号通路相关基因及蛋白表达的影响 | 第65-71页 |
| 4.1.1 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内LKB1mRNA和LKB1蛋白表达的影响 | 第65-66页 |
| 4.1.2 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内AMPKmRNA和AMPK蛋白表达的影响 | 第66-67页 |
| 4.1.3 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内p-AMPK蛋白表达的影响 | 第67页 |
| 4.1.4 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内TSC2mRNA和TSC2蛋白表达的影响 | 第67-68页 |
| 4.1.5 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内mTORmRNA和mTOR蛋白表达的影响 | 第68-69页 |
| 4.1.6 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内ULK1mRNA和ULK1蛋白表达的影响 | 第69页 |
| 4.1.7 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内p-ULK蛋白表达的影响 | 第69-70页 |
| 4.1.8 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内P27mRNA和P27蛋白表达的影响 | 第70页 |
| 4.1.9 通腑养髓方对SH-SY5Y细胞内LC3A/BmRNA和LC3A/B蛋白表达的影响 | 第70-71页 |
| 小结 | 第71页 |
| 总结 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 综述 | 第82-89页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 附录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
