| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 前言 | 第7-15页 |
| 1. Sabin株脊髓灰质炎疫苗对消灭脊灰的重要作用及其存在的问题 | 第7-8页 |
| 2. Sabin株脊髓灰质炎病毒神经毒力的检测方法 | 第8-11页 |
| 3、MAPREC方法的相关技术及其方法简介 | 第11-13页 |
| 4、MAPREC技术在神经毒力的检测方面的进展及意义 | 第13-15页 |
| 一、实验材料和实验方法 | 第15-42页 |
| (一) 材料和仪器设备 | 第15-17页 |
| 1、细胞 | 第15页 |
| 2、脊髓灰质炎病毒毒种 | 第15-16页 |
| 3、试剂和设备 | 第16-17页 |
| 4、主要设备仪器 | 第17页 |
| (二) 实验方法 | 第17-42页 |
| 1、细胞培养 | 第17-19页 |
| 2、病毒培养 | 第19-22页 |
| 3、病毒RNA的提取 | 第22-24页 |
| 4、cDNA第一链的合成 | 第24-26页 |
| 5、引物的合成 | 第26-33页 |
| 6、参考品DNA的合成 | 第33页 |
| 7、不对称PCR扩增 | 第33-35页 |
| 8、PCR扩增反应产物的检测 | 第35-37页 |
| 9、最优荧光标记引物浓度的确定 | 第37-40页 |
| 10、限制性内切酶消化 | 第40-41页 |
| 11、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及成像分析 | 第41-42页 |
| 二、实验结果 | 第42-52页 |
| (一) 细胞的培养 | 第42-43页 |
| 1、细胞的复苏 | 第42页 |
| 2、细胞传代 | 第42页 |
| 3、生物反应器中的细胞传代 | 第42-43页 |
| (二) 病毒的培养 | 第43-45页 |
| 1、接种病毒时的细胞数量 | 第43页 |
| 2、病毒滴度的检测 | 第43-44页 |
| 3、病毒的病变 | 第44-45页 |
| (三) RNA的提取结果 | 第45-46页 |
| (四) PCR扩增产物的检测 | 第46-47页 |
| (五) 荧光标记引物最优浓度的确定 | 第47-48页 |
| (六) 酶切效果的确认 | 第48-49页 |
| (七) 各样品的突变结果 | 第49-52页 |
| 三、讨论 | 第52-58页 |
| 1、通过分析疫苗株病毒的变异情况选择分析位点 | 第52页 |
| 2、MAPREC片段的选择 | 第52-54页 |
| 3、MAPREC片段合成方法的选择 | 第54-55页 |
| 4、核酸凝胶染料的选择 | 第55-56页 |
| 5、电泳凝胶的选择 | 第56-57页 |
| 6、MAPREC方法检测突变结果的分析 | 第57页 |
| 7、小结 | 第57-58页 |
| 四、结论与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 研究生简历 | 第67-68页 |
