| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1.文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 捻转血矛线虫概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 捻转血矛线虫简介 | 第12页 |
| 1.1.2 捻转血矛线虫的形态结构及生活史 | 第12-13页 |
| 1.1.3 捻转血矛线虫的流行病学 | 第13-14页 |
| 1.1.4 捻转血矛线虫的致病作用和症状 | 第14-15页 |
| 1.1.5 捻转血矛线虫的诊断及防治 | 第15页 |
| 1.2 滞育机制(Dauer)在C.elegans中的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 鸟苷酸环化酶信号传导通路(Guanylylcyclasepathway) | 第17页 |
| 1.2.2 胰岛素样生长因子信号传导通路(Insulin-likesignallingpathway) | 第17-18页 |
| 1.2.3 TGF-β样生长因子信号传导通路(TGF-β-likepatyway) | 第18页 |
| 1.2.4 DAF-12核激素受体信号传导通路(DAF-12NHRpathway) | 第18-19页 |
| 1.3 DAF-12核激素受体信号传导通路在哺乳动物、寄生线虫和C.elegans中的研究 | 第19-23页 |
| 1.3.1 核激素受体 | 第20-21页 |
| 1.3.2 DAF-12 | 第21-23页 |
| 1.4 滞育机制在在寄生线虫中的研究 | 第23-25页 |
| 1.4.1 H.contortusiL3与C.elegansdauer的相似特点 | 第23-24页 |
| 1.4.2 “Dauerhypothesis”或“Daf-cparadigm”在寄生线虫中的研究 | 第24-25页 |
| 1.5 RNAi在动物寄生线虫基因功能研究中的应用 | 第25-27页 |
| 1.5.1 RNAi的机制 | 第25页 |
| 1.5.2 RNAi在动物寄生线虫中的研究应用 | 第25-27页 |
| 2.研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 3.材料与方法 | 第28-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第28页 |
| 3.1.2 菌株与虫株 | 第28页 |
| 3.2 实验仪器与试剂 | 第28-31页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第28页 |
| 3.2.2 工具酶与试剂 | 第28-29页 |
| 3.2.3 溶液的配制 | 第29-31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-54页 |
| 3.3.1 捻转血矛线虫虫卵、L3、成虫的获得 | 第31-32页 |
| 3.3.2 捻转血矛线虫gDNA的提取及ITS-2鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.3 捻转血矛线虫RNA的提取 | 第33-34页 |
| 3.3.4 捻转血矛线虫中Hc-daf-12各发育阶段转录水平分析 | 第34页 |
| 3.3.5 引物的设计与合成 | 第34-35页 |
| 3.3.6 用Genomewalker扩增启动子序列及序列的查找 | 第35-37页 |
| 3.3.7 实验中全部所用质粒的构建 | 第37-42页 |
| 3.3.8 重组蛋白的原核表达、Western-blot鉴定及纯化 | 第42-44页 |
| 3.3.9 多克隆抗体的制备、纯化及检测 | 第44-46页 |
| 3.3.10 秀丽隐杆线虫饲喂法RNAi | 第46-47页 |
| 3.3.11 捻转血矛线虫饲喂法RNAi | 第47-49页 |
| 3.3.12 捻转血矛线虫浸泡法RNAi | 第49-51页 |
| 3.3.13 荧光定量PCR | 第51-53页 |
| 3.3.14 生物信息学分析 | 第53-54页 |
| 4.结果和分析 | 第54-84页 |
| 4.1 捻转血矛线虫各个发育阶段的收集及鉴定 | 第54页 |
| 4.1.1 捻转血矛线虫各个发育阶段的收集 | 第54页 |
| 4.1.2 捻转血矛线虫ITS-2序列鉴定 | 第54页 |
| 4.2 捻转血矛线虫核激素样受体Hc-daf-12基因结构的分析 | 第54-60页 |
| 4.2.1 Hc-daf-12全长cDNA序列的获得 | 第54-56页 |
| 4.2.2 Hc-daf-12全长gDNA序列的获得 | 第56-57页 |
| 4.2.3 Hc-daf-12全长基因结构的分析 | 第57-58页 |
| 4.2.4 Hc-daf-12全长氨基酸序列比对及进化树分析 | 第58-60页 |
| 4.3 捻转血矛线虫核激素样受体Hc-daf-12基因功能的研究 | 第60-84页 |
| 4.3.1 Hc-daf-12基因各个发育阶段转录水平分析 | 第60-61页 |
| 4.3.2 Hc-daf-12基因上游启动子序列的获得及启动子在C.e中定位的研究 | 第61-67页 |
| 4.3.3 Hc-DAF-12-LBD多克隆抗体在H.c中定位的研究 | 第67-71页 |
| 4.3.4 Hc-daf-12在秀丽隐杆线虫中饲喂法 RNAi 后虫体表型检测 | 第71-75页 |
| 4.3.5 Hc-daf-12在H.c中饲喂法/浸泡法RNAi后虫体表型检测 | 第75-84页 |
| 5.讨论 | 第84-88页 |
| 5.1 Hc-daf-12进化及序列的保守性 | 第84-85页 |
| 5.2 Hc-daf-12基因在各个发育阶段转录水平分析 | 第85页 |
| 5.3 Hc-daf-12多抗在捻转血矛线虫中的定位 | 第85-86页 |
| 5.4 Hc-daf-12影响捻转血矛线虫生长发育 | 第86-87页 |
| 5.5 Hc-daf-12在捻转血矛线虫饲喂法RNAi与浸泡法RNAi结果不一致可能性原因 | 第87-88页 |
| 6.结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 附录1 | 第104-108页 |
