| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 生菜简介 | 第13页 |
| 1.2 花青素 | 第13-19页 |
| 1.2.1 花青素的化学结构及分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 花青素的生物学功能 | 第14页 |
| 1.2.3 花青素合成途径及相关结构基因 | 第14-17页 |
| 1.2.4 花青素合成相关的调节基因 | 第17-19页 |
| 1.3 光诱导花青素合成的分子机制 | 第19-21页 |
| 1.4 基因的定位与克隆 | 第21-23页 |
| 1.5 课题开展的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 筛选单基因分离群体 | 第26-27页 |
| 2.2.2 生菜叶片红色调控基因初定位 | 第27-28页 |
| 2.2.3 开发分子标记 | 第28页 |
| 2.2.4 生菜叶片红色调控基因精细定位 | 第28-29页 |
| 2.2.5 差异表达基因鉴定及功能分析 | 第29页 |
| 2.2.6 候选基因同源性分析 | 第29页 |
| 2.2.7 比对生菜不同品种间候选基因序列差异 | 第29页 |
| 2.2.8 分析花青素合成相关基因表达量 | 第29-31页 |
| 2.2.9 测定生菜分离群体中花青素含量 | 第31页 |
| 2.2.10 测定分离群体中代谢物质含量 | 第31-32页 |
| 2.2.11 候选基因功能验证与作用机理分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-53页 |
| 3.1 生菜叶色分离群体的筛选 | 第33-48页 |
| 3.1.1 叶片红色调控基因RLL5的初定位 | 第33-36页 |
| 3.1.2 叶片红色调控基因RLL5的精细定位 | 第36-38页 |
| 3.1.3 RLL5候选基因预测 | 第38-39页 |
| 3.1.4 不同生菜品种间RLL5基因序列比对分析 | 第39-40页 |
| 3.1.5 两个极端池中差异表达基因分析 | 第40-42页 |
| 3.1.6 RLL5重组自交系花青素合成相关基因的表达分析 | 第42页 |
| 3.1.7 RLL5重组自交系中花青素含量的测定 | 第42-43页 |
| 3.1.8 RLL5重组自交系花青素种类检测和营养物质比较 | 第43-44页 |
| 3.1.9 RLL5转基因功能验证 | 第44-45页 |
| 3.1.10 RLL5基因同源性分析 | 第45页 |
| 3.1.11 RLL5与RLL1、RLL2蛋白质互作关系验证 | 第45-46页 |
| 3.1.12 RLL5与UVR8蛋白质互作关系验证 | 第46-48页 |
| 3.2 M9×S1 F_2叶片红色分离群体的鉴定 | 第48-53页 |
| 3.2.1 M9×S1 F_2叶片红色调控基因的初定位 | 第48-50页 |
| 3.2.2 候选区段内基因的注释分析 | 第50-51页 |
| 3.2.3 差异表达基因分析 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-59页 |
| 4.1 生菜叶片颜色调控基因的分子机理 | 第53页 |
| 4.2 光诱导的生菜花青素合成途径 | 第53-54页 |
| 4.3 生菜中花青素合成相关基因调控模型 | 第54-56页 |
| 4.4 生菜基因组学的研究 | 第56页 |
| 4.5 工作展望 | 第56-59页 |
| 4.5.1 生菜叶片红色调控基因RLL5的功能验证及分子机理分析 | 第56-57页 |
| 4.5.2 新的叶色调控基因的定位 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 附录 | 第67-84页 |
| 附录1 主要试剂及配制方法 | 第67-69页 |
| 1.1 CTAB提取缓冲液试剂的配制 | 第67页 |
| 1.2 50倍TAE缓冲液的配制 | 第67页 |
| 1.3 MS固体培养基的配制 | 第67-68页 |
| 1.4 LB固体培养基的配制 | 第68页 |
| 1.5 植物组织培养常用的抗生素的配制 | 第68页 |
| 1.6 酵母双杂交试验试剂的配制 | 第68页 |
| 1.7 营养缺陷型培养基的配制 | 第68-69页 |
| 1.8 YPDA培养基的配制方法 | 第69页 |
| 附录2 试验步骤及反应体系 | 第69-78页 |
| 2.1 生菜超表达载体的构建 | 第69-73页 |
| 2.1.1 目的片段PCR扩增 | 第69-70页 |
| 2.1.2 目的片段回收 | 第70-71页 |
| 2.1.3 目的条带遗传转化 | 第71-73页 |
| 2.2 生菜转基因流程 | 第73-74页 |
| 2.2.1 实生无菌苗的获得 | 第73页 |
| 2.2.2 预培养 | 第73页 |
| 2.2.3 共培养 | 第73页 |
| 2.2.4 分化和筛选 | 第73页 |
| 2.2.5 切芽生根 | 第73-74页 |
| 2.3 酵母点对点杂交过程 | 第74-76页 |
| 2.3.1 酵母感受态制备 | 第74页 |
| 2.3.2 酵母双杂交载体共转化酵母感受态 | 第74-75页 |
| 2.3.3 阳性克隆鉴定 | 第75页 |
| 2.3.4 生菜叶片RNA提取方法 | 第75-76页 |
| 2.4 PCR反应 | 第76页 |
| 2.5 酶切反应体系 | 第76-77页 |
| 2.6 反转录过程 | 第77页 |
| 2.7 QRT-PCR方法 | 第77-78页 |
| 附录3 引物序列表 | 第78-82页 |
| 引物序列表3-1 | 第78-79页 |
| 引物序列表3-2 | 第79页 |
| 引物序列表3-3 | 第79-80页 |
| 引物序列表3-4 | 第80-81页 |
| 引物序列表3-5 | 第81-82页 |
| 附录4 花青素种类 | 第82-83页 |
| 附录5 RLL5基因序列 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
