| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1.1 PRRS病原概述 | 第13-26页 |
| 1.1.1 PRRS爆发及其分布 | 第13-15页 |
| 1.1.2 PRRSV感染的临床症状 | 第15-16页 |
| 1.1.3 PRRSV病毒学研究进展 | 第16-18页 |
| 1.1.4 PRRSV感染过程及相关受体 | 第18-22页 |
| 1.1.5 PRRSV感染引发IFN信号通路介导的免疫反应 | 第22-23页 |
| 1.1.6 PRRSV的疫苗制备 | 第23-24页 |
| 1.1.7 用于PRRSV感染研究的细胞系 | 第24-26页 |
| 1.2 种属特异性病毒易感小鼠模型构建的现状 | 第26-29页 |
| 1.2.1 病毒转基因小鼠模型 | 第26页 |
| 1.2.2 人肝嵌合体小鼠模型 | 第26-27页 |
| 1.2.3. 人源化受体转基因小鼠模型 | 第27-29页 |
| 1.3 PiggyBac转座子表达系统的研究进展 | 第29-33页 |
| 1.3.1 转座子的概念 | 第29页 |
| 1.3.2 转座子的分类 | 第29-30页 |
| 1.3.3 PiggyBac转座子 | 第30-33页 |
| 1.4 本课题的研究目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-38页 |
| 2.1.1 菌株、载体和病毒 | 第34页 |
| 2.1.2 细胞系和实验动物 | 第34页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.1.4 试剂和抗体 | 第35-36页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第36-37页 |
| 2.1.6 分析软件/网站 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-55页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备和转化 | 第38页 |
| 2.2.2 菌落PCR及PCR反应条件及体系 | 第38-39页 |
| 2.2.3 质粒DNA提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4 细胞的复苏、传代培养及冻存 | 第40-41页 |
| 2.2.5 细胞转染、筛选及单克隆获取 | 第41-42页 |
| 2.2.6 总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.7 反转录和定量PCR | 第43-45页 |
| 2.2.8 PRRSV繁殖以及TCID_(50)法测定滴度 | 第45-46页 |
| 2.2.9 病毒感染细胞和免疫荧光实验 | 第46-47页 |
| 2.2.10 制备转基因小鼠及相关鉴定 | 第47-48页 |
| 2.2.11 地高辛法Southern blot | 第48-51页 |
| 2.2.12 整合拷贝数的计算 | 第51页 |
| 2.2.13 蛋白电泳和Western blot | 第51-53页 |
| 2.2.14 流式细胞术分选相关细胞亚群 | 第53-54页 |
| 2.2.15 数据处理及统计学分析 | 第54-55页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第55-84页 |
| 第一部分: 构建和分析PRRSV易感的BHK-21细胞系 | 第55-71页 |
| 3.1 PRRSV受体表达载体的鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2 BHK-21细胞的转染及阳性克隆鉴定 | 第56-60页 |
| 3.3 BHK-21转基因细胞系感染PRRSV效率的鉴定 | 第60-64页 |
| 3.3.1 细胞克隆的选取与鉴定 | 第60-61页 |
| 3.3.2 转基因细胞系的生长状态和倍增时间 | 第61页 |
| 3.3.3 转基因细胞系的病毒感染实验 | 第61-64页 |
| 3.4 BHK-21-TTG 比 MARC-145细胞更易感染PRRSV | 第64-68页 |
| 3.4.1 PRRSV在BHK-21-TTG细胞中复制能力强于MARC-145细胞 | 第64-66页 |
| 3.4.2 BHK-21-TTG细胞系能释放出更多的病毒 | 第66-68页 |
| 3.5 PRRSV诱导BHK-21-TTG细胞的相关炎症因子的变化 | 第68-69页 |
| 3.6 分析与讨论 | 第69-71页 |
| 第二部分: 构建和分析PRRSV易感的小鼠模型 | 第71-84页 |
| 3.7 转基因小鼠模型的制备与鉴定 | 第71-73页 |
| 3.7.1 显微共注射法制备转基因小鼠 | 第71页 |
| 3.7.2 阳性小鼠的PCR鉴定 | 第71-72页 |
| 3.7.3 阳性小鼠的拷贝数鉴定 | 第72-73页 |
| 3.7.4 阳性小鼠的Southern blot鉴定 | 第73页 |
| 3.8 目的基因的表达分析 | 第73-75页 |
| 3.8.1 转基因小鼠目的基因mRNA的定量分析 | 第73-75页 |
| 3.8.2 外源基因目的蛋白的表达分析 | 第75页 |
| 3.9 转基因小鼠的病毒感染分析 | 第75-82页 |
| 3.9.1 转基因小鼠攻毒后体内病毒感染分析 | 第75-79页 |
| 3.9.2 体外分离的巨噬细胞的病毒感染分析 | 第79-82页 |
| 3.10 讨论与分析 | 第82-84页 |
| 第四章 结论与展望 | 第84-85页 |
| 4.1 结论 | 第84页 |
| 4.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附录 | 第96-124页 |
| 附录一、实验所用引物序列 | 第96-98页 |
| 附录二、猪源、鼠源和猴源PRRSV受体氨基酸序列同源性比对 | 第98-106页 |
| 附录三、构建三种PRRSV受体表达载体序列信息 | 第106-123页 |
| 附录四、制备的PRRSV受体抗体 | 第123-124页 |
| 作者简历 | 第124页 |
