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微生物β-1,3-葡聚糖的强化合成及最小功能单元挖掘

摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第一章 绪论第11-25页
   ·概述第11-14页
     ·β-1,3-葡聚糖和β-1,3-葡聚寡糖结构第11页
     ·β-1,3-葡聚糖和β-1,3-葡聚寡糖的理化性质第11页
     ·β-1,3-葡聚糖功能及其应用第11-13页
     ·β-1,3-葡聚寡糖功能及应用第13-14页
   ·β-1, 3-葡聚糖(热凝胶)的生物合成第14-17页
     ·选育高产菌株第15-16页
     ·优化发酵条件和过程控制第16页
     ·改进生物反应器第16-17页
   ·多糖的寡聚化及其构—效关系研究方法第17-19页
     ·多糖的寡聚化及分离第17页
     ·寡糖结构和序列的解析方法第17-18页
     ·拟糖脂糖芯片技术第18-19页
   ·本论文的主要研究内容第19-25页
     ·β1,3-葡聚糖(热凝胶)发酵法生产及其功能开发中存在的问题第19-22页
     ·本论文的主要研究内容第22-25页
第二章 Agrobacterium sp. ATCC 31749 呼吸链的构建及其基因组特异性分析第25-41页
   ·前言第25-27页
   ·材料与方法第27-29页
     ·菌株与培养基第27页
     ·Agrobacterium sp. ATCC 31749 基因组DNA 的提取与纯化第27页
     ·电子呼吸链基因简并引物的设计第27-28页
     ·ETCs 基因部分DNA 序列的PCR 扩增、纯化与测序第28页
     ·ETCs 基因保守序列的注册第28页
     ·基因序列的鉴定与系统进化树分析第28-29页
   ·结果第29-37页
     ·电子呼吸链蛋白基因序列测定与比对分析第29-34页
     ·Agrobacterium sp. ATCC 31749 基因组的特异性分析第34-35页
     ·Agrobacterium sp. ATCC 31749 电子呼吸链构建第35-37页
   ·讨论第37-38页
     ·Agrobacterium sp. ATCC 31749 中UDP-葡萄糖的高效再生机制第37页
     ·Agrobacterium sp. ATCC 31749 高度近似菌株A. tumefaciens C58 的发现及其潜在应用价值第37-38页
     ·基于比较基因组信息构建Agrobacterium sp. ATCC 31749 代谢网络第38页
   ·本章小结第38-41页
第三章 不同溶氧水平对β-1,3-葡聚糖合成途径中关键酶的转录影响第41-57页
   ·前言第41页
   ·材料与方法第41-46页
     ·菌株第41-42页
     ·种子的培养基与分批发酵培养基配方第42页
     ·总DNA 的提取第42-43页
     ·icd, glm M 和gal U 的引物设计和PCR 扩增第43页
     ·PCR 产物纯化、DNA 测序和分析第43-44页
     ·生物反应器的校正和培养条件第44页
     ·总RNA 的提取第44页
     ·cDNA 合成和qRT-PCR 扩增第44-46页
   ·结果第46-53页
     ·icd,glm M 和gal U 基因片段的序列分析第46-47页
     ·不同的DO 控制模式和培养条件对热凝胶合成的影响第47-49页
     ·不同溶氧水平对关键基因转录水平的影响第49-53页
   ·讨论第53-55页
     ·Agrobacterium sp. ATCC 31749 通过调整基因表达来适应DO 胁迫第53-54页
     ·溶氧通过增强基因的转录来增强β-1,3-葡聚糖(热凝胶)的合成第54页
     ·Agrobacterium sp. ATCC 31749 在不同溶氧下的转录调控机制第54-55页
   ·本章小结第55-57页
第四章 基于溶氧和pH 双调控策略强化β-1,3-葡聚糖合成研究第57-69页
   ·前言第57页
   ·材料与方法第57-59页
     ·菌株第57页
     ·培养基第57页
     ·种子的培养第57-58页
     ·分批发酵培养第58页
     ·胞内代谢物分析方法第58页
     ·生物量和热凝胶产量的测定第58-59页
     ·凝胶强度的检测第59页
   ·结果第59-65页
     ·不同溶氧水平对β-1,3-葡聚糖(热凝胶)合成及凝胶强度的影响第59-62页
     ·不同溶氧浓度对β-1,3-葡聚糖(热凝胶)生产过程的影响第62页
     ·不同溶氧浓度对胞内核苷酸丰度的影响第62-65页
     ·基于两阶段溶氧与pH 策略提高热凝胶产量第65页
   ·讨论第65-68页
     ·Agrobacterium sp. ATCC 31749通过改变葡萄糖比消耗率率和糖代谢流应对DO胁 迫第66页
     ·胞内核苷酸调控用于β-1,3-葡聚糖(热凝胶)合成的葡萄糖代谢流第66-67页
     ·两阶段溶氧控制策略强化β-1,3-葡聚糖(热凝胶)生物合成第67-68页
   ·本章小结第68-69页
第五章 葡聚寡糖芯片的构建及其与功能蛋白相互作用研究第69-117页
   ·前言第69-71页
   ·材料与方法第71-78页
     ·试剂第71-72页
     ·寡糖与多糖第72-74页
     ·多糖水解与分离第74-75页
     ·寡糖质谱分析第75-76页
     ·寡糖 NMR(核磁共振)分析第76页
     ·磷脂试剂AOPE 的合成第76页
     ·葡聚寡糖拟糖脂(NGLs)合成方法的进一步发展第76-77页
     ·葡聚寡糖NGLs 探针的合成、纯化及分析第77页
     ·葡聚寡糖NGLs 芯片的制备、芯片检测与数据处理第77-78页
   ·结果第78-113页
     ·葡聚寡糖库的构建及寡糖结构特征分析第78-94页
     ·NGLs 合成体系的优化第94-97页
     ·葡聚寡糖NGLs 探针合成与分子量的测定第97-107页
     ·葡聚寡糖库及芯片的建立及其质量评估第107-109页
     ·葡聚糖芯片与Dectin-1 和DC-SIGN 蛋白之间的作用分析第109-113页
   ·讨论第113-116页
     ·多糖水解寡糖的酸解液浓度规律第113页
     ·寡糖质谱与核磁特征第113页
     ·DMSO 有效提高拟糖脂的合成效率第113-114页
     ·功能蛋白Dectin-1 和DC-SIGN 与葡聚寡糖之间的作用分析第114-116页
   ·本章小结第116-117页
结论第117-119页
论文创新点第119-121页
致谢第121-123页
ACKNOWLEDGEMENTS第123-125页
参考文献第125-139页
附录1:作者在攻读博士学位期间发表的论文第139-141页
附录2:英文缩写与中文名称对照第141-143页
附录3:寡糖探针在糖芯片上的位置及其结构第143-149页

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