摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-11页 |
第一章 绪论 | 第11-25页 |
·概述 | 第11-14页 |
·β-1,3-葡聚糖和β-1,3-葡聚寡糖结构 | 第11页 |
·β-1,3-葡聚糖和β-1,3-葡聚寡糖的理化性质 | 第11页 |
·β-1,3-葡聚糖功能及其应用 | 第11-13页 |
·β-1,3-葡聚寡糖功能及应用 | 第13-14页 |
·β-1, 3-葡聚糖(热凝胶)的生物合成 | 第14-17页 |
·选育高产菌株 | 第15-16页 |
·优化发酵条件和过程控制 | 第16页 |
·改进生物反应器 | 第16-17页 |
·多糖的寡聚化及其构—效关系研究方法 | 第17-19页 |
·多糖的寡聚化及分离 | 第17页 |
·寡糖结构和序列的解析方法 | 第17-18页 |
·拟糖脂糖芯片技术 | 第18-19页 |
·本论文的主要研究内容 | 第19-25页 |
·β1,3-葡聚糖(热凝胶)发酵法生产及其功能开发中存在的问题 | 第19-22页 |
·本论文的主要研究内容 | 第22-25页 |
第二章 Agrobacterium sp. ATCC 31749 呼吸链的构建及其基因组特异性分析 | 第25-41页 |
·前言 | 第25-27页 |
·材料与方法 | 第27-29页 |
·菌株与培养基 | 第27页 |
·Agrobacterium sp. ATCC 31749 基因组DNA 的提取与纯化 | 第27页 |
·电子呼吸链基因简并引物的设计 | 第27-28页 |
·ETCs 基因部分DNA 序列的PCR 扩增、纯化与测序 | 第28页 |
·ETCs 基因保守序列的注册 | 第28页 |
·基因序列的鉴定与系统进化树分析 | 第28-29页 |
·结果 | 第29-37页 |
·电子呼吸链蛋白基因序列测定与比对分析 | 第29-34页 |
·Agrobacterium sp. ATCC 31749 基因组的特异性分析 | 第34-35页 |
·Agrobacterium sp. ATCC 31749 电子呼吸链构建 | 第35-37页 |
·讨论 | 第37-38页 |
·Agrobacterium sp. ATCC 31749 中UDP-葡萄糖的高效再生机制 | 第37页 |
·Agrobacterium sp. ATCC 31749 高度近似菌株A. tumefaciens C58 的发现及其潜在应用价值 | 第37-38页 |
·基于比较基因组信息构建Agrobacterium sp. ATCC 31749 代谢网络 | 第38页 |
·本章小结 | 第38-41页 |
第三章 不同溶氧水平对β-1,3-葡聚糖合成途径中关键酶的转录影响 | 第41-57页 |
·前言 | 第41页 |
·材料与方法 | 第41-46页 |
·菌株 | 第41-42页 |
·种子的培养基与分批发酵培养基配方 | 第42页 |
·总DNA 的提取 | 第42-43页 |
·icd, glm M 和gal U 的引物设计和PCR 扩增 | 第43页 |
·PCR 产物纯化、DNA 测序和分析 | 第43-44页 |
·生物反应器的校正和培养条件 | 第44页 |
·总RNA 的提取 | 第44页 |
·cDNA 合成和qRT-PCR 扩增 | 第44-46页 |
·结果 | 第46-53页 |
·icd,glm M 和gal U 基因片段的序列分析 | 第46-47页 |
·不同的DO 控制模式和培养条件对热凝胶合成的影响 | 第47-49页 |
·不同溶氧水平对关键基因转录水平的影响 | 第49-53页 |
·讨论 | 第53-55页 |
·Agrobacterium sp. ATCC 31749 通过调整基因表达来适应DO 胁迫 | 第53-54页 |
·溶氧通过增强基因的转录来增强β-1,3-葡聚糖(热凝胶)的合成 | 第54页 |
·Agrobacterium sp. ATCC 31749 在不同溶氧下的转录调控机制 | 第54-55页 |
·本章小结 | 第55-57页 |
第四章 基于溶氧和pH 双调控策略强化β-1,3-葡聚糖合成研究 | 第57-69页 |
·前言 | 第57页 |
·材料与方法 | 第57-59页 |
·菌株 | 第57页 |
·培养基 | 第57页 |
·种子的培养 | 第57-58页 |
·分批发酵培养 | 第58页 |
·胞内代谢物分析方法 | 第58页 |
·生物量和热凝胶产量的测定 | 第58-59页 |
·凝胶强度的检测 | 第59页 |
·结果 | 第59-65页 |
·不同溶氧水平对β-1,3-葡聚糖(热凝胶)合成及凝胶强度的影响 | 第59-62页 |
·不同溶氧浓度对β-1,3-葡聚糖(热凝胶)生产过程的影响 | 第62页 |
·不同溶氧浓度对胞内核苷酸丰度的影响 | 第62-65页 |
·基于两阶段溶氧与pH 策略提高热凝胶产量 | 第65页 |
·讨论 | 第65-68页 |
·Agrobacterium sp. ATCC 31749通过改变葡萄糖比消耗率率和糖代谢流应对DO胁 迫 | 第66页 |
·胞内核苷酸调控用于β-1,3-葡聚糖(热凝胶)合成的葡萄糖代谢流 | 第66-67页 |
·两阶段溶氧控制策略强化β-1,3-葡聚糖(热凝胶)生物合成 | 第67-68页 |
·本章小结 | 第68-69页 |
第五章 葡聚寡糖芯片的构建及其与功能蛋白相互作用研究 | 第69-117页 |
·前言 | 第69-71页 |
·材料与方法 | 第71-78页 |
·试剂 | 第71-72页 |
·寡糖与多糖 | 第72-74页 |
·多糖水解与分离 | 第74-75页 |
·寡糖质谱分析 | 第75-76页 |
·寡糖 NMR(核磁共振)分析 | 第76页 |
·磷脂试剂AOPE 的合成 | 第76页 |
·葡聚寡糖拟糖脂(NGLs)合成方法的进一步发展 | 第76-77页 |
·葡聚寡糖NGLs 探针的合成、纯化及分析 | 第77页 |
·葡聚寡糖NGLs 芯片的制备、芯片检测与数据处理 | 第77-78页 |
·结果 | 第78-113页 |
·葡聚寡糖库的构建及寡糖结构特征分析 | 第78-94页 |
·NGLs 合成体系的优化 | 第94-97页 |
·葡聚寡糖NGLs 探针合成与分子量的测定 | 第97-107页 |
·葡聚寡糖库及芯片的建立及其质量评估 | 第107-109页 |
·葡聚糖芯片与Dectin-1 和DC-SIGN 蛋白之间的作用分析 | 第109-113页 |
·讨论 | 第113-116页 |
·多糖水解寡糖的酸解液浓度规律 | 第113页 |
·寡糖质谱与核磁特征 | 第113页 |
·DMSO 有效提高拟糖脂的合成效率 | 第113-114页 |
·功能蛋白Dectin-1 和DC-SIGN 与葡聚寡糖之间的作用分析 | 第114-116页 |
·本章小结 | 第116-117页 |
结论 | 第117-119页 |
论文创新点 | 第119-121页 |
致谢 | 第121-123页 |
ACKNOWLEDGEMENTS | 第123-125页 |
参考文献 | 第125-139页 |
附录1:作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第139-141页 |
附录2:英文缩写与中文名称对照 | 第141-143页 |
附录3:寡糖探针在糖芯片上的位置及其结构 | 第143-149页 |