| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 1 实验材料仪器与试剂 | 第18-27页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 1.2 主要试剂和材料 | 第19-20页 |
| 1.2.1 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.2.2 菌株、质粒和细胞株来源 | 第20页 |
| 1.3 主要试剂配制方法 | 第20-27页 |
| 1.3.1 有关细菌实验试剂配方 | 第20-21页 |
| 1.3.2 有关细胞培养试剂配方 | 第21-22页 |
| 1.3.3 有关分子实验试剂配方 | 第22页 |
| 1.3.4 Western Blot 所用试剂配制 | 第22-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-43页 |
| 2.1 分子隆质粒载体克的构建 | 第27-30页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.1.2 聚合酶链式反应(PCR) | 第27-28页 |
| 2.1.3 PCR产物中的模板消化 | 第28页 |
| 2.1.4 连接 | 第28页 |
| 2.1.5 DH5α 感受态制备 | 第28-29页 |
| 2.1.6 转化 | 第29页 |
| 2.1.7 挑取Hsf4b/S299突变单克隆、Hsf4b/S299突变质粒提取及其酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.1.8 Eco RI酶切鉴定正确的Hsf4b/S299突变质粒送测序 | 第30页 |
| 2.1.9 NCBI Blast 对测序结果进行比对，Hsf4b/S299 突变质粒构建完成 | 第30页 |
| 2.2 细胞复苏、细胞培养、细胞传代和细胞冻存方法 | 第30-32页 |
| 2.2.1 细胞的复苏 | 第30-31页 |
| 2.2.2 细胞的培养 | 第31页 |
| 2.2.3 细胞的传代 | 第31页 |
| 2.2.4 细胞的冻存 | 第31-32页 |
| 2.3 Hsf4b/S299突变细胞稳定株的构建和Hsf4b/S299突变对Hsf4b转录活性影响检测 | 第32-43页 |
| 2.3.1 细胞稳定株的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.2 细胞免疫荧光 | 第33-34页 |
| 2.3.3 RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.3.4 逆转录 | 第35页 |
| 2.3.5 Realtime PCR | 第35页 |
| 2.3.6 细胞裂解和蛋白提取 | 第35-36页 |
| 2.3.7 BCA法测细胞内总蛋白量 | 第36-37页 |
| 2.3.8 Western Blot | 第37-39页 |
| 2.3.9 Luciferase Assay | 第39-40页 |
| 2.3.10 染色质免疫共沉实验（CHIP） | 第40-41页 |
| 2.3.11 Hsf4b半衰期的测定 | 第41-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-53页 |
| 3.1 Hsf4b/S299稳定株突变质粒的构建 | 第43-45页 |
| 3.1.1 Hsf4b/S299 c DNA全长的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第43页 |
| 3.1.2 Hsf4b/S299突变质粒的获得及其酶切鉴定 | 第43-45页 |
| 3.1.3 NCBI上基因序列比对结果 | 第45页 |
| 3.2 Hsf4b/S299突变稳定细胞株的构建 | 第45-48页 |
| 3.3 Hsf4b/S299突变影响Hsf4b对下游基因m RNA水平的调控 | 第48页 |
| 3.4 Hsf4b/S299突变影响Hsf4b对下游基因蛋白水平的调控 | 第48-49页 |
| 3.5 Hsf4b/S299突变不影响Hsf4b的细胞亚定位 | 第49-50页 |
| 3.6 Hsf4b/S299突变不影响Hsf4b蛋白稳定性 | 第50-52页 |
| 3.7 Luciferase Assay检测突变稳定细胞株中Hsf4b的DNA结合能力 | 第52页 |
| 3.8 CHIP Assay检测突变稳定细胞株中Hsf4b的DNA结合能力 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 小结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 文献综述 | 第59-71页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及研究成果 | 第73-74页 |
