| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-20页 |
| 1.1 片形吸虫病及片形吸虫概述 | 第15页 |
| 1.2 ESPs对于片形吸虫寄生的重要性 | 第15-16页 |
| 1.3 ESPs的分类 | 第16-19页 |
| 1.3.1 氧化应激相关蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3.2 能量代谢相关蛋白 | 第17页 |
| 1.3.3 蛋白水解酶 | 第17-18页 |
| 1.3.4 Cathepsin B | 第18页 |
| 1.3.5 Cathepsin L | 第18-19页 |
| 1.4 展望 | 第19-20页 |
| 第二章 大片吸虫14-3-3e基因和Rab-10基因的克隆、表达和序列分析 | 第20-36页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 虫体与动物 | 第20页 |
| 2.1.2 菌种和载体 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 大片吸虫总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.2 大片吸虫总RNA的反转录 | 第21-22页 |
| 2.2.3 引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.2.4 PCR扩增14-3-3e和Rab-10基因 | 第23-24页 |
| 2.2.5 PCR产物的纯化 | 第24页 |
| 2.2.6 PCR产物与T载体的连接 | 第24页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第24页 |
| 2.2.8 阳性克隆的酶切鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.9 重组质粒测序 | 第25页 |
| 2.2.10 表达载体的构建与鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.10.1 重组质粒pPIC9K-14-3-3e的构建 | 第25页 |
| 2.2.10.2 重组质粒pPIC9K-14-3-3e的线性化 | 第25-26页 |
| 2.2.10.3 酵母电感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.2.10.4 转化与菌落筛选 | 第26页 |
| 2.2.10.5 重组质粒pET-SUMO-Rab-10的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.11 重组蛋白的诱导表达 | 第27-29页 |
| 2.2.11.1 重组蛋白14-3-3e的小量诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.2.11.2 重组蛋白14-3-3e的大量诱导表达 | 第28页 |
| 2.2.11.3 重组蛋白14-3-3e的纯化 | 第28页 |
| 2.2.11.4 重组蛋白Rab-10的小量诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.2.11.5 重组蛋白Rab-10分布的确定 | 第29页 |
| 2.2.11.6 重组蛋白Rab-10的纯化 | 第29页 |
| 2.2.12 重组蛋白多克隆血清的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.13 人工感染大片吸虫的山羊血清的制备 | 第30页 |
| 2.2.14 重组蛋白的Western-blot验证 | 第30页 |
| 2.3 结果 | 第30-35页 |
| 2.3.1 14 -3-3e、Rab-10基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.2 重组克隆质粒pMD19-T-14-3-3e和pMD19-T-Rab-10的鉴定 | 第31页 |
| 2.3.3 14 -3-3e、Rab-10基因的序列分析 | 第31-32页 |
| 2.3.4 重组表达质粒pPIC9K-14-3-3e和pET-SUMO-Rab-10的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.5 重组蛋白r14-3-3e和rRab-10的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.6 重组蛋白r14-3-3e和rRab-10的Western-blot分析 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 大片吸虫r14-3-3e、rRab-10与山羊PBMCs的结合实验 | 第36-41页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第36页 |
| 3.1.2 重组蛋白 | 第36页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 大片吸虫r14-3-3e、rRab-10对山羊PBMCs细胞因子分泌的影响 | 第41-46页 |
| 4.1 材料 | 第41页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第41页 |
| 4.1.2 重组蛋白 | 第41页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第41页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第41页 |
| 4.2 方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1 山羊PBMCs的分离与培养 | 第41-42页 |
| 4.2.2 细胞因子的检测 | 第42-43页 |
| 4.2.3 数据分析 | 第43页 |
| 4.3 结果 | 第43-44页 |
| 4.3.1 r14-3-3e对细胞因子分泌的影响 | 第43页 |
| 4.3.2 rRab-10对细胞因子分泌的影响 | 第43-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第五章 大片吸虫r14-3-3e、rRab-10对山羊PBMCs增殖和迁移的影响 | 第46-51页 |
| 5.1 材料 | 第46页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第46页 |
| 5.1.2 重组蛋白 | 第46页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第46页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第46页 |
| 5.2 方法 | 第46-48页 |
| 5.2.1 细胞增殖实验 | 第46-47页 |
| 5.2.2 细胞迁移实验 | 第47-48页 |
| 5.2.3 数据分析 | 第48页 |
| 5.3 结果 | 第48-49页 |
| 5.3.1 r14-3-3e对山羊PBMCs增殖和迁移的影响 | 第48-49页 |
| 5.3.2 rRab-10对山羊PBMCs增殖和迁移的影响 | 第49页 |
| 5.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第六章 大片吸虫r14-3-3e、rRab-10对山羊PBMCs总一氧化氮的产生和山羊单核细胞吞噬能力的影响 | 第51-56页 |
| 6.1 材料 | 第51页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第51页 |
| 6.1.2 重组蛋白 | 第51页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第51页 |
| 6.1.4 主要仪器设备 | 第51页 |
| 6.2 方法 | 第51-54页 |
| 6.2.1 总一氧化氮的检测 | 第51-52页 |
| 6.2.2 单核细胞吞噬能力的分析 | 第52-53页 |
| 6.2.3 数据分析 | 第53-54页 |
| 6.3 结果 | 第54-55页 |
| 6.3.1 r14-3-3e对山羊PBMCs总一氧化氮的产生和山羊单核细胞吞噬能力的影响 | 第54页 |
| 6.3.2 rRab-10对山羊PBMCs总一氧化氮的产生和山羊单核细胞吞噬能力的影响 | 第54-55页 |
| 6.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第七章 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66页 |
