| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第16-22页 |
| 1.1 鸡球虫病的危害及防治现状 | 第16页 |
| 1.2 寄生虫与宿主互作关系的研究 | 第16-17页 |
| 1.2.1 寄生虫与宿主的致病机制 | 第16-17页 |
| 1.2.2 寄生虫的免疫逃避机制 | 第17页 |
| 1.3 同位素标记相对和绝对定量蛋白组技术研究进展 | 第17-21页 |
| 1.3.1 iTRAQ技术原理及试验流程 | 第17-18页 |
| 1.3.2 iTRAQ技术的优缺点 | 第18页 |
| 1.3.3 iTRAQ技术在寄生虫研究中的应用 | 第18-21页 |
| 1.4 BHK-21细胞培养模型 | 第21页 |
| 1.5 展望 | 第21-22页 |
| 第二章 基于iTRAQ技术分析柔嫩艾美耳球虫感染BHK-21细胞的蛋白质组学 | 第22-39页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料和方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 细胞和虫株 | 第22页 |
| 2.2.2 仪器和试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 卵囊的收集与纯化和子孢子的提取 | 第23页 |
| 2.2.4 BHK细胞的复苏与培养 | 第23页 |
| 2.2.5 入侵实验 | 第23页 |
| 2.2.6 样品的收集与细胞全蛋白的提取 | 第23页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE分析 | 第23-24页 |
| 2.2.8 酶解和肽段定量与标记 | 第24页 |
| 2.2.9 SCX分级 | 第24页 |
| 2.2.10 质谱鉴定 | 第24页 |
| 2.2.11 质谱数据分析 | 第24页 |
| 2.2.12 生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.2.13 Real-timePCR验证差异表达蛋白 | 第25页 |
| 2.2.14 差异表达蛋白的Western-blot | 第25-26页 |
| 2.3 结果 | 第26-36页 |
| 2.3.1 入侵时间和剂量的优化 | 第26页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE电泳 | 第26-27页 |
| 2.3.3 差异蛋白的鉴定 | 第27-29页 |
| 2.3.4 COG聚类分析 | 第29-30页 |
| 2.3.5 差异蛋白的生物信息学分析 | 第30-34页 |
| 2.3.6 qRT-PCR和WB验证差异蛋白 | 第34-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-39页 |
| 2.4.1 压力和防御 | 第36页 |
| 2.4.2 免疫反应 | 第36页 |
| 2.4.3 凋亡 | 第36-37页 |
| 2.4.4 代谢 | 第37页 |
| 2.4.5 膜 | 第37-39页 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫子孢子感染对宿主活化蛋白激酶C受体1的影响 | 第39-47页 |
| 3.1 前言 | 第39页 |
| 3.2 材料和方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 材料 | 第39页 |
| 3.2.2 cDNA模板的制备 | 第39页 |
| 3.2.3 pGEX-6P-1-RACK1原核表达质粒的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.4 RACK1-GST重组蛋白的表达与纯化 | 第40页 |
| 3.2.5 RACK1-GST纯化蛋白的验证 | 第40页 |
| 3.2.6 重组蛋白RACK1-GST多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| 3.2.7 子孢子的收集与纯化 | 第40页 |
| 3.2.8 细胞样品的收集 | 第40页 |
| 3.2.9 子孢子感染对RACK1转录水平影响 | 第40-41页 |
| 3.2.10 子孢子感染对RACK1蛋白翻译水平影响 | 第41页 |
| 3.2.11 RACK1抗体对子孢子入侵细胞能力的影响 | 第41页 |
| 3.3 结果 | 第41-45页 |
| 3.3.1 鸡肌肉组织总RNA的提取 | 第41页 |
| 3.3.2 RACK1基因的克隆 | 第41-42页 |
| 3.3.3 RACK1-GST重组蛋白的表达与纯化 | 第42-43页 |
| 3.3.4 RACK1-GST融合蛋白的验证 | 第43页 |
| 3.3.5 子孢子感染对RACK1转录水平的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.6 子孢子感染对RACK1蛋白翻译水平的影响 | 第44页 |
| 3.3.7 rRACK1抗体对球虫子孢子入侵细胞的影响 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫子孢子感染对宿主MTA3和LBR的影响 | 第47-53页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 材料与方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 实验细胞 | 第47页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第47页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第47-48页 |
| 4.2.4 主要实验试剂的配制 | 第48页 |
| 4.2.5 细胞样品的收集 | 第48页 |
| 4.2.6 子孢子的收集与纯化 | 第48页 |
| 4.2.7 子孢子感染对MTA3和LBR转录水平影响 | 第48-49页 |
| 4.2.8 子孢子感染对MTA3和LBR蛋白翻译水平影响 | 第49页 |
| 4.2.9 MTA3和LBR抗体对子孢子入侵细胞能力的影响 | 第49页 |
| 4.3 结果 | 第49-51页 |
| 4.3.1 子孢子感染对MTA3和LBR转录水平影响 | 第49-50页 |
| 4.3.2 子孢子感染对MTA3和LBR蛋白翻译水平影响 | 第50页 |
| 4.3.3 MTA3和LBR抗体对子孢子入侵细胞能力的影响 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫子孢子感染对细胞凋亡的影响 | 第53-57页 |
| 5.1 前言 | 第53页 |
| 5.2 材料与方法 | 第53-54页 |
| 5.2.1 实验细胞 | 第53页 |
| 5.2.2 实验试剂与仪器 | 第53页 |
| 5.2.3 样品的制备 | 第53-54页 |
| 5.2.4 Bradford法测定蛋白浓度 | 第54页 |
| 5.2.5 caspase3和caspase9酶活性的检测 | 第54页 |
| 5.3 结果 | 第54-56页 |
| 5.3.1 子孢子感染引发的与凋亡相关的KEGG通路 | 第54-55页 |
| 5.3.2 凋亡水平检测 | 第55-56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-57页 |
| 第六章 全文总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
