| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写说明 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 阿扎那韦的研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1.1 艾滋病简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 阿扎那韦及其临床研究 | 第13-14页 |
| 1.1.3 阿扎那韦的作用机制 | 第14-16页 |
| 1.1.4 阿扎那韦的合成路线 | 第16-18页 |
| 1.1.5 (2R,3S)-1,2-环氧-3-叔丁氧羰基氨基-4-苯基丁烷的合成路线. | 第18-19页 |
| 1.2 手性醇的合成 | 第19-21页 |
| 1.2.1 化学法合成手性醇 | 第19-20页 |
| 1.2.2 生物法合成手性醇 | 第20-21页 |
| 1.3 还原反应中辅酶的循环再生 | 第21-23页 |
| 1.3.1 光化学法 | 第21页 |
| 1.3.2 电化学法再生 | 第21-22页 |
| 1.3.4 酶法再生 | 第22-23页 |
| 1.4 (3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的酶催化制备方法 | 第23-25页 |
| 1.5 立题依据 | 第25页 |
| 1.6 主要研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 酮基还原酶表达菌株的构建 | 第27-43页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第29页 |
| 2.2.3 质粒、菌株与培养基 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.3.1 大肠杆菌的培养与保藏 | 第30页 |
| 2.3.2 CaCl2法制备E.coliDH5α和E.coliBL21(DE3)感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.3.3 转化大肠杆菌质粒 | 第31页 |
| 2.3.4 碱裂解法抽提大肠杆菌质粒 | 第31-32页 |
| 2.3.5 目的DNA片段的胶回收 | 第32页 |
| 2.3.6 核酸琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.7 DNA的酶切 | 第32-33页 |
| 2.3.8 DNA片段的连接 | 第33-34页 |
| 2.3.9 酮基还原酶重组质粒的构建 | 第34页 |
| 2.3.10 重组酶蛋白的试表达 | 第34页 |
| 2.3.11 蛋白表达条件的优化 | 第34-35页 |
| 2.3.12 酮基还原酶酶活的测定 | 第35页 |
| 2.3.13 蛋白质浓度的测定 | 第35-36页 |
| 2.3.14 SDS-PAGE蛋白质电泳的检测 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第37-42页 |
| 2.4.1 酮基还原酶酶表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| 2.4.2 酮基还原酶酶活的测定 | 第38页 |
| 2.4.3 粗酶液的蛋白质浓度的测定 | 第38-39页 |
| 2.4.4 重组酶蛋白E.coliBL21-KRED表达条件的优化 | 第39-42页 |
| 2.4.5 E.coliBL21-KRED蛋白质含量的测定 | 第42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 酮基还原酶催化制备(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇 | 第43-67页 |
| 3.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第44-45页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-49页 |
| 3.2.1 重组酶蛋白E.coliBL21-KRED的粗酶液制备 | 第45-46页 |
| 3.2.2 氯醇的TLC检测 | 第46页 |
| 3.2.3 氯醇的HPLC分析 | 第46页 |
| 3.2.4 氯醇的分析与含量测定 | 第46页 |
| 3.2.5 氯醇粗品的制备工艺 | 第46-47页 |
| 3.2.6 氯醇的精制方法 | 第47-48页 |
| 3.2.7 氯醇的回收工艺 | 第48页 |
| 3.2.8 重组表达菌株E.coliBL21-KRED的罐发酵培养 | 第48-49页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第49-64页 |
| 3.3.1 转化氯醇的分析与含量测定 | 第49-50页 |
| 3.3.2 TLC与HPLC方法实验 | 第50-52页 |
| 3.3.3 氯酮投料量与反应的催化极限 | 第52-54页 |
| 3.3.4 反应pH对转化率的影响 | 第54页 |
| 3.3.5 反应温度对转化率的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.6 缓冲液对转化率的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.7 助溶剂比例与反应转化率 | 第56-57页 |
| 3.3.8 反应过程与投料 | 第57-58页 |
| 3.3.9 氯醇粗品制备方法 | 第58-62页 |
| 3.3.10 重组表达菌株E.coliBL21-KRED的罐发酵培养 | 第62-63页 |
| 3.3.11 KRED催化制备氯醇的工艺放大 | 第63-64页 |
| 3.4 转化产物的鉴定 | 第64-65页 |
| 3.5 工艺流程图 | 第65页 |
| 3.6 结论 | 第65-67页 |
| 第四章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 4.1 结论 | 第67页 |
| 4.2 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录1 产物氯酮的MS报告 | 第74-75页 |
| 附录2 产物氯酮的HNMR报告 | 第75-76页 |
| 附录3 产物氯酮的CNMR报告 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
