| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-52页 |
| 1.1 双生病毒概括及研究进展 | 第14-25页 |
| 1.1.1 双生病毒的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 Begomoviruses的基因组结构和功能 | 第15-18页 |
| 1.1.3 Begomoviruses卫星分子的结构和功能 | 第18-21页 |
| 1.1.4 双生病毒的致病机理 | 第21-25页 |
| 1.2 病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系 | 第25-40页 |
| 1.2.1 RNA沉默原理 | 第25-26页 |
| 1.2.2 植物miRNA概况及研究进展 | 第26-31页 |
| 1.2.3 病毒诱导的基因沉默体系(VIGS) | 第31-40页 |
| 1.3 棉花黄萎病简介及研究进展 | 第40-51页 |
| 1.3.1 黄萎病病症 | 第40-41页 |
| 1.3.2 黄萎病菌的生活史 | 第41-42页 |
| 1.3.3 黄萎病菌致病的分子机制 | 第42-43页 |
| 1.3.4 植物抵抗黄萎病的机理 | 第43-45页 |
| 1.3.5 植物抵抗黄萎病的分子机制 | 第45-47页 |
| 1.3.6 植物LysM蛋白的简介和作用 | 第47-51页 |
| 1.4 本研究目的与意义 | 第51-52页 |
| 第二章 实验方法 | 第52-59页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第52-53页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第52页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第52-53页 |
| 2.2 常规克隆技术 | 第53-57页 |
| 2.2.1 普通PCR反应 | 第53页 |
| 2.2.2 PCR产物纯化 | 第53-54页 |
| 2.2.3 载体的去磷酸化 | 第54页 |
| 2.2.4 连接 | 第54-55页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备 | 第55页 |
| 2.2.6 转化 | 第55页 |
| 2.2.7 质粒微量提取试剂盒 | 第55-56页 |
| 2.2.8 PCR鉴定 | 第56页 |
| 2.2.9 酶切鉴定 | 第56-57页 |
| 2.3 重组质粒导入根癌农杆菌 | 第57页 |
| 2.3.1 根癌农杆菌感受态细胞制备 | 第57页 |
| 2.3.2 重组质粒电击转化根癌农杆菌 | 第57页 |
| 2.4 棉花核酸提取方法 | 第57-59页 |
| 2.4.1 棉花DNA提取 | 第57-58页 |
| 2.4.2 棉花RNA和小RNA提取 | 第58-59页 |
| 第三章 基于棉花叶皱缩病毒(CLCRV)的棉花VIGS体系的建立 | 第59-86页 |
| 3.1 材料与方法 | 第59-70页 |
| 3.1.1 生物材料 | 第59-60页 |
| 3.1.2 沉默载体构建 | 第60-64页 |
| 3.1.3 农杆菌浸润植物方法 | 第64页 |
| 3.1.4 利用qRT-PCR检测miRNA含量 | 第64-65页 |
| 3.1.5 核酸杂交 | 第65-70页 |
| 3.2 结果与分析 | 第70-83页 |
| 3.2.1 农杆菌介导的CLCrV沉默载体的构建 | 第70-71页 |
| 3.2.2 CLCrV沉默载体能在棉花中持久、高效的诱导基因沉默 | 第71-72页 |
| 3.2.3 沉默载体能在多个棉花品种中诱导基因沉默 | 第72-73页 |
| 3.2.4 外源片段长度对CLCrV载体沉默效率的影响 | 第73-75页 |
| 3.2.5 CLCrV能够同时沉默Gh-EF1α家族不同成员 | 第75-76页 |
| 3.2.6 利用CLCrV下调转基因棉花中转基因的表达 | 第76-77页 |
| 3.2.7 CLCrV载体可用于在棉花中过量表达miRNA | 第77-79页 |
| 3.2.8 利用CLCrV表达small tandem target mimic(STTM)抑制miRNA功能 | 第79-82页 |
| 3.2.9 利用CLCrV体系表达人工miRNA(artificial miRNA,amiRNA) | 第82-83页 |
| 3.3 讨论 | 第83-86页 |
| 第四章 LYK(LYSM DOMAIN-CONTAINING RECEPTOR-LIKE KINASE)家族基因在棉花抵抗黄萎病中的功能研究 | 第86-112页 |
| 4.1 材料与方法 | 第87-96页 |
| 4.1.1 材料 | 第87页 |
| 4.1.2 载体构建 | 第87-90页 |
| 4.1.3 分裂泛素化酵母双杂交系统 | 第90-92页 |
| 4.1.4 双分子荧光互补实验 | 第92页 |
| 4.1.5 棉花黄萎病的病情指数统计 | 第92-93页 |
| 4.1.6 外源基因在大肠杆菌中的表达、蛋白质纯化 | 第93-94页 |
| 4.1.7 SDS-PAGE与Western blot | 第94-95页 |
| 4.1.8 几丁质结合实验 | 第95页 |
| 4.1.9 体外磷酸化实验 | 第95-96页 |
| 4.2 结果与分析 | 第96-109页 |
| 4.2.1 棉花LYK家族成员对大丽轮枝菌侵染的响应 | 第96-99页 |
| 4.2.2 Gh-LYK1和Gh-LYK2的沉默降低棉花抵抗黄萎病的能力 | 第99-101页 |
| 4.2.3 Gh-LYK1和Gh-LYK2功能域的鉴定 | 第101-104页 |
| 4.2.4 感病品种ZN905的LYK2缺失跨膜区 | 第104-105页 |
| 4.2.5 棉花ZN905品种中Gh-LYK2(ZN905)的功能鉴定 | 第105-106页 |
| 4.2.6 Gh-LYK1和Gh-LYK2的亚细胞定位 | 第106-108页 |
| 4.2.7 Gh-LYK2氨基酸序列在棉花抗病和感病品种中存在普遍性的差异 | 第108-109页 |
| 4.3 讨论 | 第109-112页 |
| 第五章 全文小结与展望 | 第112-114页 |
| 5.1 全文小结 | 第112-113页 |
| 5.2 展望 | 第113-114页 |
| 附录A 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第114-116页 |
| 附录B 本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第116-117页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第117-122页 |
| 参考文献 | 第122-139页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第139页 |
