| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 插图和附表清单 | 第13-16页 |
| 縮略语表 | 第16-18页 |
| 1 引言 | 第18-35页 |
| 1.1 病原学 | 第18-23页 |
| 1.1.1 狂犬病毒的分类 | 第18-19页 |
| 1.1.2 狂犬病病毒的分子生物学特点 | 第19-23页 |
| 1.2 流行病学研究进展 | 第23-27页 |
| 1.2.1 传染源和宿主 | 第23-25页 |
| 1.2.2 传播途径 | 第25-26页 |
| 1.2.3 影响发病的因素 | 第26页 |
| 1.2.4 狂犬病流行范围 | 第26-27页 |
| 1.3 病理学研究 | 第27-30页 |
| 1.3.1 病理学变化 | 第27-29页 |
| 1.3.2 发病机理研究进展 | 第29-30页 |
| 1.4 狂犬病的诊断与防制 | 第30-33页 |
| 1.4.1 狂犬病的诊断 | 第30-31页 |
| 1.4.2 狂犬病的防制 | 第31-33页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第33-35页 |
| 2 牛狂犬病自然病例的病理学研究 | 第35-56页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-40页 |
| 2.1.1 材料 | 第35-37页 |
| 2.1.2 方法 | 第37-40页 |
| 2.2 结果 | 第40-54页 |
| 2.2.1 动物自然病例发病情况与临床症状 | 第40-41页 |
| 2.2.2 自然病例病理学检查 | 第41-53页 |
| 2.2.3 自然病例核酸检测 | 第53-54页 |
| 2.3 讨论 | 第54-55页 |
| 2.4 小结 | 第55-56页 |
| 3 3株狂犬病病毒的全基因组测序 | 第56-72页 |
| 3.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 3.1.1 狂犬病犬牛脑标本来源 | 第56页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第56页 |
| 3.1.3 狂犬病病毒全基因组测序所用标本 | 第56页 |
| 3.1.4 实验道德规范 | 第56页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第56-57页 |
| 3.1.6 主要试剂 | 第57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-64页 |
| 3.2.1 接种用脑组织的处理 | 第57页 |
| 3.2.2 接种方法 | 第57-58页 |
| 3.2.3 小鼠接种后观察 | 第58页 |
| 3.2.4 接种后直接免疫荧光检测 | 第58-59页 |
| 3.2.5 用于狂犬病毒N基因序列的扩增引物 | 第59页 |
| 3.2.6 设计用于分段扩增狂犬病病毒全基因组序列的引物 | 第59-60页 |
| 3.2.7 设计用于病毒基因组末端的基因序列扩增引物 | 第60页 |
| 3.2.8 细胞总RNA的提取 | 第60-61页 |
| 3.2.9 cDNA合成 | 第61页 |
| 3.2.10 PCR和序列测定 | 第61页 |
| 3.2.11 狂犬病病毒基因组末端的基因序列扩增 | 第61-64页 |
| 3.3 实验结果 | 第64-69页 |
| 3.3.1 狂犬病毒分离扩增结果 | 第64页 |
| 3.3.2 直接免疫荧光检测结果 | 第64-65页 |
| 3.3.3 狂犬病毒N基因的PCR扩增结果 | 第65-66页 |
| 3.3.4 全基因组序列PCR反应产物电泳结果 | 第66-67页 |
| 3.3.5 狂犬病毒的基因组全长与各基因及其编码区域 | 第67-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-70页 |
| 3.4.1 引物设计 | 第69-70页 |
| 3.4.2 确保序列测定的准确性 | 第70页 |
| 3.4.3 全基因组的长度 | 第70页 |
| 3.4.4 (G+C)%含量 | 第70页 |
| 3.5 小结 | 第70-72页 |
| 4 3株内蒙古狂犬病病毒的全基因组序列的分析 | 第72-135页 |
| 4.1 材料与方法 | 第72-74页 |
| 4.1.1 用于狂犬病毒全基因组序列分析的参考序列 | 第72页 |
| 4.1.2 用于狂犬病病毒N基因序列分析的参考序列 | 第72-74页 |
| 4.2 用于序列分析的生物信息学常用软件 | 第74-75页 |
| 4.2.1 用于序列拼接的ATGC软件 | 第74-75页 |
| 4.2.2 ClustalX(1.8)软件 | 第75页 |
| 4.2.3 BioEdit软件 | 第75页 |
| 4.2.4 GeneDoc软件 | 第75页 |
| 4.2.5 MEGA(5)软件 | 第75页 |
| 4.2.6 DNAStar(5.01)软件包中MegAlign软件 | 第75页 |
| 4.3 狂犬病病毒的全基因组序列分析结果 | 第75-126页 |
| 4.3.1 狂犬病毒全基因序列的同源性分析 | 第75-76页 |
| 4.3.2 各结构基因所编码蛋白情况分析 | 第76页 |
| 4.3.3 结构蛋白基因同源性比较 | 第76-78页 |
| 4.3.4 非编码区序列比较 | 第78-81页 |
| 4.3.5 各结构蛋白的功能位点比较 | 第81-126页 |
| 4.4 讨论 | 第126-133页 |
| 4.4.1 3株狂犬病毒街毒株N基因(核蛋白)分析 | 第126-127页 |
| 4.4.2 基因组分子特征 | 第127-130页 |
| 4.4.3 遗传系谱间差异比较 | 第130-131页 |
| 4.4.4 种系发生分析 | 第131页 |
| 4.4.5 街毒株与疫苗株的比较研究 | 第131-132页 |
| 4.4.6 同源性分析 | 第132页 |
| 4.4.7 3株病毒致病性差异分析 | 第132-133页 |
| 4.5 小结 | 第133-135页 |
| 5 牛狂犬病病毒毒株实验感染小鼠的病理学研究 | 第135-173页 |
| 5.1 材料与方法 | 第135-139页 |
| 5.1.1 实验道德规范 | 第135页 |
| 5.1.2 病毒株 | 第135页 |
| 5.1.3 实验动物 | 第135页 |
| 5.1.4 病毒悬液的制备与病毒滴度的检测 | 第135页 |
| 5.1.5 狂犬病病毒的接种与接种后观察 | 第135-136页 |
| 5.1.6 小鼠脑组织的收集与组织切片的制备 | 第136页 |
| 5.1.7 狂犬病病毒特异性抗原定位 | 第136页 |
| 5.1.8 电镜检查 | 第136页 |
| 5.1.9 脑标本的病理组织学观察 | 第136页 |
| 5.1.10 脑组织切片CD3+T淋巴细胞的免疫荧光染色 | 第136-137页 |
| 5.1.11 CD11b小胶质细胞的免疫荧光染色 | 第137页 |
| 5.1.12 活化的半胱天冬酶-3(Caspase-3)的间接免疫荧光染色 | 第137页 |
| 5.1.13 微管相关蛋白(MAP-2)的免疫荧光染色 | 第137-138页 |
| 5.1.14 神经细胞MAP-2与狂犬病毒抗原共定位 | 第138页 |
| 5.1.15 IL-1βmRNA、RANTES mRNA及TIMP-1 mRNA原位杂交检测 | 第138页 |
| 5.1.16 脑组织免疫荧光染色与激光扫描共聚焦观察 | 第138-139页 |
| 5.1.17 数据处理与统计 | 第139页 |
| 5.2 实验结果 | 第139-164页 |
| 5.2.1 乳鼠接种病毒后的脑内病毒滴度、体重变化及病死率 | 第139-140页 |
| 5.2.2 外周和颅内两种接种方式对不同年龄段小鼠的致病性和感染能力 | 第140-141页 |
| 5.2.3 狂犬病病毒特异性抗原检测结果 | 第141-142页 |
| 5.2.4 神经细胞与神经纤维的病理变化 | 第142-143页 |
| 5.2.5 电镜检查 | 第143-146页 |
| 5.2.6 3株狂犬病毒在发病后濒死前乳鼠脑内的抗原分布 | 第146-148页 |
| 5.2.7 3株狂犬病毒在乳鼠脑组织内不同部位的病毒抗原含量 | 第148-151页 |
| 5.2.8 乳鼠脑组织内CD3+T淋巴细胞的浸润 | 第151-153页 |
| 5.2.9 乳鼠脑组织内CD11b小胶质细胞的活化 | 第153-155页 |
| 5.2.10 3株狂犬病毒乳鼠脑组织内Caspase-3免疫荧光染色结果 | 第155-157页 |
| 5.2.11 乳鼠脑组织微管相关蛋白2的荧光免疫荧光染色结果 | 第157页 |
| 5.2.12 乳鼠脑组织病毒抗原与微管相关蛋白2病变的相关性 | 第157-158页 |
| 5.2.13 乳鼠脑组织狂犬病病毒抗原阳性细胞激光扫描共聚焦观察结果 | 第158-159页 |
| 5.2.14 乳鼠脑组织原位杂交IL-1β mRNA染色结果 | 第159-161页 |
| 5.2.15 乳鼠脑组织原位杂交RANTES mRNA染色结果 | 第161-163页 |
| 5.2.16 乳鼠脑组织原位杂交TIMP-1 mRNA染色结果 | 第163-164页 |
| 5.3 讨论 | 第164-172页 |
| 5.3.1 乳鼠脑组织神经细胞的病理学变化 | 第164-166页 |
| 5.3.2 3株病毒脑组织内抗原分布差异分析 | 第166页 |
| 5.3.3 3株病毒致乳鼠脑组织细胞凋亡情况 | 第166-167页 |
| 5.3.4 乳鼠脑组织炎性细胞情况 | 第167-168页 |
| 5.3.5 乳鼠脑组织神经细胞树突的病变 | 第168-169页 |
| 5.3.6 乳鼠脑组织狂犬病病毒抗原阳性细胞免疫荧光方法特异性鉴定 | 第169页 |
| 5.3.7 乳鼠脑组织原位杂交IL-1β mRNA染色结果 | 第169-170页 |
| 5.3.8 乳鼠脑组织原位杂交RANTES mRNA染色结果 | 第170-171页 |
| 5.3.9 乳鼠脑组织原位杂交TIMP-1 mRNA染色结果 | 第171-172页 |
| 5.4 小结 | 第172-173页 |
| 6 结论 | 第173-174页 |
| 7 创新点 | 第174-175页 |
| 致谢 | 第175-176页 |
| 附录 | 第176-197页 |
| 参考文献 | 第197-216页 |
| 作者简介 | 第216页 |
