| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 英文缩写词 | 第6-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 艾滋病概况 | 第12页 |
| 1.2 HIV-1 Tat 的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 Tat 蛋白的结构与功能 | 第12-13页 |
| 1.2.2 Tat 参与 HIV-1 转录激活的机制 | 第13-14页 |
| 1.2.3 Tat 蛋白的修饰影响其转录激活的活性 | 第14页 |
| 1.3 表观遗传参与基因的表达调控 | 第14-15页 |
| 1.4 组蛋白的甲基化和去甲基化酶修饰 | 第15-16页 |
| 1.5 组蛋白 H3K27 甲基化酶 EZH2 的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.5.1 EZH2 的结构与功能 | 第16页 |
| 1.5.2 EZH2 与肿瘤 | 第16-18页 |
| 1.5.3 EZH2 参与细胞分化和器官形成 | 第18页 |
| 1.5.4 EZH2 与其它表观遗传修饰酶的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.5.5 EZH2 的抑制剂 | 第19页 |
| 1.6 组蛋白 H3K27 去甲基化酶 UTX 的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.6.1 UTX 的结构和功能 | 第19-20页 |
| 1.6.2 UTX 与肿瘤 | 第20页 |
| 1.6.3 UTX 参与细胞分化和器官形成 | 第20-21页 |
| 1.6.4 UTX 参与线虫寿命调节 | 第21页 |
| 1.6.5 UTX 的抑制剂 | 第21页 |
| 1.7 表观遗传学与 HIV-1 感染 | 第21-22页 |
| 1.8 研究内容和目的 | 第22-24页 |
| 第2章 EZH2，UTX 及 Tat 突变体质粒的构建 | 第24-32页 |
| 引言 | 第24页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 工具酶和试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 引物的设计、合成与测序 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 2.1.5 溶液的配制 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 突变位点的确定和引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.2 利用 PCR 反应进行质粒的定点突变 | 第26-27页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物 | 第27页 |
| 2.2.4 PCR 产物的消化 | 第27页 |
| 2.2.5 质粒的转化与菌落挑取 | 第27-28页 |
| 2.2.6 质粒提取（碱裂解法） | 第28页 |
| 2.2.7 质粒测序 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-30页 |
| 2.3.1 EZH2、UTX、Tat 质粒的 PCR 产物 | 第29-30页 |
| 2.3.2 EZH2、UTX、Tat 突变体质粒的转化、提取、测序 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 EZH2 在 Tat 介导的 HIV-1 转录激活中的作用 | 第32-50页 |
| 引言 | 第32页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第32-33页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-41页 |
| 3.2.1 高纯无内毒素质粒提取 | 第34-35页 |
| 3.2.2 细胞的复苏与培养 | 第35页 |
| 3.2.3 细胞转染 | 第35-36页 |
| 3.2.4 MAGI 实验 | 第36页 |
| 3.2.5 细胞存活率分析 | 第36页 |
| 3.2.6 Real-time RCR 检测 | 第36-39页 |
| 3.2.7 Western Blot 检测 | 第39-41页 |
| 3.2.8 统计分析处理方法 | 第41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-47页 |
| 3.3.1 转染不同剂量的 Tat 质粒对 LTR 激活作用的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.2 EZH2 siRNA 对 Tat 介导的 LTR 激活作用的影响 | 第42页 |
| 3.3.3 EZH2 的抑制剂 DZNep 对 Tat 介导的 LTR 激活作用的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.4 转染 EZH2 质粒及各突变体对细胞内 EZH2 蛋白水平的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.5 EZH2 及其突变体过表达对 Tat 介导的 LTR 激活作用的影响 | 第44页 |
| 3.3.6 转染 Tat 质粒对 EZH2 mRNA 水平的影响 | 第44-46页 |
| 3.3.7 转染 Tat 质粒对细胞内 EZH2 蛋白水平的影响 | 第46页 |
| 3.3.8 转染 Tat 质粒对细胞内 H3K27me2、H3K27me3 水平的影响 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 本章小结 | 第48-50页 |
| 第4章 UTX 在 Tat 介导的 HIV-1 转录激活中的作用 | 第50-56页 |
| 引言 | 第50页 |
| 4.1 实验材料 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-54页 |
| 4.3.1 UTX 的 siRNA 对 Tat 介导的 LTR 激活作用的影响 | 第51页 |
| 4.3.2 转染 UTX 质粒及各突变体对细胞内 UTX 蛋白水平的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.3 UTX 及其突变体过表达对 Tat 介导的 LTR 激活作用的影响 | 第52页 |
| 4.3.4 转染 Tat 质粒对 UTX mRNA 水平的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.5 转染 Tat 质粒对细胞内 UTX 蛋白水平的影响 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54页 |
| 4.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第5章 EGCG 影响 Nrf2、AKT、AMPK 通路抑制 Tat 介导的 LTR 转录激活 | 第56-60页 |
| 引言 | 第56页 |
| 5.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 5.1.1 细胞株 | 第56页 |
| 5.1.2 试剂与耗材 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57页 |
| 5.3 实验结果 | 第57-58页 |
| 5.3.1 EGCG 抑制 Tat 介导的 LTR 转录激活及其涉及的信号转导通路 | 第57页 |
| 5.3.2 EGCG 对转染 Tat 质粒的 MAGI 细胞中 Nrf2 蛋白表达的影响 | 第57-58页 |
| 5.3.3 EGCG 对转染 Tat 质粒的 MAGI 细胞中 AKT 和 AMPK 信号通路的 影响 | 第58页 |
| 5.4 讨论 | 第58-59页 |
| 5.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 A | 第68-69页 |
| 附录 B | 第69-70页 |
| 附录 C | 第70-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
