| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-27页 |
| 第一部分 CML 细胞中 RalA 表达水平检测 | 第27-39页 |
| 实验材料和方法 | 第27-35页 |
| 1. 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2. 核苷酸序列与引物 | 第28页 |
| 3. 细胞株 | 第28页 |
| 4. 主要试剂配制 | 第28-29页 |
| 5. 主要仪器和材料 | 第29-30页 |
| 6. 实验方法 | 第30-35页 |
| 6.1 细胞培养 | 第30页 |
| 6.2 不同样品中的内源性 RalA GTP 酶活性的检测 | 第30-32页 |
| 6.3 G-LISA~(TM)Ral Activation Assay Biochem Kit~(TM)检测外源性 miR-181a 和 RalA siRNA 对K562 细胞内 RalA GTP 酶活性的影响 | 第32-33页 |
| 6.4 统计学处理 | 第33页 |
| 6.5 激光共聚焦显微镜检测 RalA 胞内定位 | 第33-35页 |
| 实验结果 | 第35-37页 |
| 1. G-LISA~(TM)检测 CML 细胞的内源性 RalA GTP 酶的活性 | 第35页 |
| 2. G-LISA~(TM)检测外源性 miR-181a 和 RalA siRNA 对 K562 细胞内 RalA GTP 酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 3. 激光共聚焦显微镜检测 RalA 胞内定位 | 第36-37页 |
| 讨论 | 第37-39页 |
| 第二部分 RalA 过表达对 K562 细胞恶性转化的影响 | 第39-63页 |
| 实验材料和方法 | 第39-52页 |
| 1. 主要试剂 | 第39-40页 |
| 2. 质粒 | 第40-41页 |
| 3. 主要试剂配制 | 第41-44页 |
| 4. 主要仪器和材料 | 第44页 |
| 5. 实验方法 | 第44-52页 |
| 5.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| 5.2 RalA 重组质粒转化感受态大肠杆菌 | 第45-46页 |
| 5.3 RalA 重组质粒的筛选 | 第46页 |
| 5.4 RalA 重组质粒的扩增 | 第46页 |
| 5.5 RalA 重组质粒的鉴定 | 第46页 |
| 5.6 RalA 重组质粒的提取 | 第46-47页 |
| 5.7 建立稳定表达 RalA 质粒的 K562 细胞株 | 第47-48页 |
| 5.8 Western Blot 检测 K562 细胞内 RalA 蛋白的相对表达水平 | 第48-49页 |
| 5.9 G-LISA~(TM)Ral Activation Assay Biochem Kit~(TM)检测过表达RalA的K562细胞内的RalA GTP酶的活性 | 第49页 |
| 5.10 Transwell 小室法检测 RalA 过表达对 K562 细胞迁移能力的影响 | 第49页 |
| 5.11 Transwell 小室法检测 RalA 过表达对 K562 细胞侵袭能力的影响 | 第49-50页 |
| 5.12 Colony 实验检测 RalA 过表达对 K562 细胞集落形成情况的影响 | 第50页 |
| 5.13 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 RalA 过表达影响 K562 细胞对 Imatinib 的反应 | 第50-51页 |
| 5.14 Colony 检测 Imatinib 对过表达 RalA 质粒的 K562 细胞集落的形成能力的影响 | 第51页 |
| 5.15 统计学处理 | 第51-52页 |
| 实验结果 | 第52-61页 |
| 1. RalA 重组质粒的鉴定 | 第52-53页 |
| 2. 过表达 RalA 重组质粒的 K562 稳定株筛选结果 | 第53-54页 |
| 3. Western Blot 检测 RalA 质粒转染后 K562 细胞内 RalA 蛋白的相对表达水平 | 第54页 |
| 4. G-LISA~(TM)检测 RalA 质粒对 K562 细胞内的 RalAGTP 酶活性的影响 | 第54-55页 |
| 5. Transwell 小室法测定 RalA 重组质粒对 K562 细胞迁移能力的影响 | 第55-56页 |
| 6. Transwell 小室法测定 RalA 重组质粒对 K562 细胞侵袭能力的影响 | 第56-57页 |
| 7. Colony 实验检测 RalA 重组质粒对 K562 细胞集落形成情况的影响 | 第57-58页 |
| 8. MTT 法检测 RalA 重组质粒影响 K562 细胞对 Imatinib 的反应 | 第58-59页 |
| 9. Colony 实验检测 RalA 重组质粒及 Imatinib 对 K562 细胞集落形成情况的影响 | 第59-61页 |
| 讨论 | 第61-63页 |
| 第三部分 靶向抑制 RalA 表达对 K562 细胞恶性转化的影响 | 第63-76页 |
| 实验材料和方法 | 第63-69页 |
| 1. 主要试剂 | 第63页 |
| 2. 主要试剂配制 | 第63页 |
| 3. 主要仪器和材料 | 第63-64页 |
| 4. 实验方法 | 第64-69页 |
| 4.1 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 miR-181a 和 RalA siRNA 影响 K562 细胞对 Imatinib 药物敏感性的作用 | 第64-65页 |
| 4.2 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 miR-181a 和 RalA siRNA 影响 K562 细胞对 Nilotinib 药物敏感性的作用 | 第65页 |
| 4.3 Transwell 小室法测定 miR-181a 和 RalA siRNA 对 K562 细胞迁移能力的影响 | 第65-66页 |
| 4.4 Transwell 小室法测定 miR-181a 和 RalA siRNA 对 K562 细胞侵袭能力的影响 | 第66-67页 |
| 4.5 Colony 实验检测 miR-181a 和 RalA siRNA 对 K562 细胞集落形成能力的影响 | 第67-68页 |
| 4.6 统计学分析 | 第68-69页 |
| 实验结果 | 第69-73页 |
| 1. MTT 法检测 miR-181a 和 RalA siRNA 影响 K562 细胞对 Imatinib 药物敏感性的作用 | 第69页 |
| 2. 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 miR-181a 和 RalA siRNA 影响 K562 细胞对 Nilotinib 药物敏感性的作用 | 第69-70页 |
| 3. Transwell 小室法测定 miR-181a 和 RalA siRNA 对 K562 细胞迁移能力的影响 | 第70-71页 |
| 4. Transwell 小室法测定 miR-181a 和 RalA siRNA 对 K562 细胞侵袭能力的影响 | 第71-72页 |
| 5. Colony 实验检测 miR-181a 和 RalA siRNA 对 K562 细胞集落形成情况的影响 | 第72-73页 |
| 讨论 | 第73-76页 |
| 第四部分 靶向抑制 RalA 对 K562 细胞下游磷酸化信号通路的影响 | 第76-85页 |
| 实验材料和方法 | 第76-80页 |
| 1. 主要试剂 | 第76页 |
| 2. 主要仪器和材料 | 第76-77页 |
| 3. 实验方法 | 第77-80页 |
| 3.1 miR-181a和RalA siRNA转染K562细胞 | 第77页 |
| 3.2 蛋白质抽题标记 | 第77-78页 |
| 3.3 芯片杂交 | 第78-79页 |
| 3.4 结果扫描 | 第79页 |
| 3.5 KEGG通路分析 | 第79-80页 |
| 实验结果 | 第80-84页 |
| 1. RalA siRNA和miR-181a靶向作用于RalA后对下游信号分子的影响 | 第80-81页 |
| 2. KEGG通路分析结果 | 第81-84页 |
| 讨论 | 第84-85页 |
| 全文结论 | 第85-86页 |
| 不足与展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-100页 |
| 附录 英文缩略词 | 第100-101页 |
| 发表的文章 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
