| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 ZFNs 的特点 | 第12-14页 |
| 1.1.1 结构特点 | 第12-13页 |
| 1.1.2 作用特点 | 第13-14页 |
| 1.2 关于 CFTR、MSTN、ApoE 基因 | 第14-15页 |
| 1.3 ZFNs 研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1 ZFPs 的发现 | 第15页 |
| 1.3.2 ZFNs 的合成 | 第15-19页 |
| 1.4 改进 OPEN 法筛选 ZFNs 系统的研究目的 | 第19-20页 |
| 1.4.1 ZFNs 的优势 | 第19页 |
| 1.4.2 同类人工合成酶的比较 | 第19-20页 |
| 1.4.3 ZFNs 构建中存在的问题 | 第20页 |
| 1.5 ZFNs 构建与筛选 | 第20-22页 |
| 1.5.1 构建 ZFPs 库 | 第21页 |
| 1.5.2 ZFPs 的筛选 | 第21-22页 |
| 1.6 ZFNs 应用研究的进展 | 第22-24页 |
| 1.6.1 国外关于 ZFNs 应用研究的进展 | 第22-23页 |
| 1.6.2 国内关于 ZFNs 应用研究的进展 | 第23-24页 |
| 1.7 研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 优化细菌双杂交筛选 ZFNs 的方法 | 第25-34页 |
| 2.1 材料 | 第25页 |
| 2.1.1 载体和菌种 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 三锌指库的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.2 靶位点的选择 | 第27页 |
| 2.2.3 构建含目的基因靶位点的报告载体和报告菌株 | 第27页 |
| 2.2.4 细菌双杂交第一轮筛选 | 第27-28页 |
| 2.2.5 细菌双杂交第二轮筛选 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-32页 |
| 2.3.1 随机 ZFPs 库的构建 | 第29页 |
| 2.3.2 目的基因 ZFN 靶位点的选择结果 | 第29-30页 |
| 2.3.3 细菌报告载体的构建结果 | 第30页 |
| 2.3.4 第一轮细菌双杂交筛选结果 | 第30-32页 |
| 2.3.5 单侧三锌指组装 | 第32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 2.5 结论 | 第33-34页 |
| 第三章 分离鉴定三锌指核酸酶 | 第34-39页 |
| 3.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1 载体和菌种 | 第34页 |
| 3.1.2 试剂 | 第34页 |
| 3.2 方法 | 第34-35页 |
| 3.2.1 构建含目的基因的酵母报告载体 | 第34页 |
| 3.2.2 构建靶位点的 ZFN 酵母表达载体 | 第34页 |
| 3.2.3 有效锌指的酵母验证 | 第34-35页 |
| 3.2.4 有效 ZFNs 的分离鉴定 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-37页 |
| 3.3.1 构建 ZFNs 的酵母报告载体及表达载体 | 第35-36页 |
| 3.3.2 在酵母上检测 ZFNs 的活性 | 第36页 |
| 3.3.3 ZFN 的分离鉴定 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 3.5 结论 | 第38-39页 |
| 第四章 总结 | 第39-40页 |
| 4.1 OPEN 法筛选 CFTR、MSTN 和 ApoE 基因 ZFNs 改良 | 第39页 |
| 4.2 在酵母上验证分离有效 ZFNs | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 附录 | 第45-54页 |
| 附录1 引物 | 第45-47页 |
| 附录2 PCR 方法 | 第47-49页 |
| 附录3 试剂配制方法 | 第49-50页 |
| 附录4 试验方法补充 | 第50-52页 |
| 附录5 部分实验结果 | 第52-53页 |
| 附录6 缩略词 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介及学术成果 | 第55页 |
