摘要 | 第5-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
第一章 文献综述 | 第10-19页 |
1.1 杆状病毒的分类 | 第10-11页 |
1.2 杆状病毒的生活周期 | 第11页 |
1.3 杆状病毒的基因组 | 第11-13页 |
1.4 杆状病毒的核心基因 | 第13-17页 |
1.4.1 复制相关基因 | 第14-15页 |
1.4.2 转录有关的基因 | 第15-16页 |
1.4.3 结构蛋白基因 | 第16-17页 |
1.4.4 辅助基因 | 第17页 |
1.5 杆状病毒的核心基因簇 | 第17页 |
1.6 本研究的目的及意义 | 第17-19页 |
第二章 材料方法 | 第19-26页 |
2.1 材料 | 第19-20页 |
2.1.1 质粒、菌种、病毒和细胞 | 第19页 |
2.1.2 工具酶及试剂盒 | 第19页 |
2.1.3 其它试剂 | 第19页 |
2.1.4 常规试剂的配制 | 第19页 |
2.1.5 实验所用引物 | 第19-20页 |
2.2 方法 | 第20-26页 |
2.2.1 感受态细胞的制备和质粒 DNA 转化 | 第20页 |
2.2.2 小量抽提质粒 DNA | 第20-21页 |
2.2.3 连接反应 | 第21页 |
2.2.4 蛋白免疫印迹分析 | 第21页 |
2.2.5 昆虫细胞的转染 | 第21页 |
2.2.6 HearNPV 基因组 DNA 的抽提 | 第21页 |
2.2.7 多克隆抗体的制备 | 第21-22页 |
2.2.8 HA81 多抗效价检测(ELISA 法) | 第22页 |
2.2.9 电转化感受态细胞 | 第22页 |
2.2.10 RNA 提取以及转录实相分析 | 第22-23页 |
2.2.11 HA81 的亚细胞定位分析 | 第23页 |
2.2.12 敲除 ha81 的 HaBac△81bacmid 的构建 | 第23页 |
2.2.13 HaBacHZ8-PG, HaBacΔ81-PG 和 HaBacRep81-PG bamids 的构建 | 第23-24页 |
2.2.14 出芽型病毒生长曲线分析 | 第24页 |
2.2.15 定量 PCR 分析病毒 DNA 复制 | 第24页 |
2.2.16 重组病毒 bacmid 转染 HzAM1 细胞的透射电子显微镜观察 | 第24-26页 |
第三章 结果与分析 | 第26-36页 |
3.1 ha81 的原核表达及多克隆抗体制备 | 第26-28页 |
3.1.1 ha81 表达载体的构建 | 第26页 |
3.1.2 pET-32a-ha81 在 BL21(DE3)中的表达 | 第26-27页 |
3.1.3 HA81 多克隆抗体的制备与效价检测 | 第27-28页 |
3.2 ha81 的转录和表达时相分析 | 第28页 |
3.3 HaBacHZ8-PG、HaBacΔ81-PG 和 HaBacRep81-PG bacmids 的构建 | 第28-30页 |
3.4 病毒生长曲线的分析 | 第30-31页 |
3.5 病毒 DNA 的复制分析 | 第31-32页 |
3.6 HA81 的亚细胞定位 | 第32-33页 |
3.7 透射电镜分析 | 第33-34页 |
3.8 ha81 对于早晚期基因及核心基因簇基因转录的影响 | 第34-35页 |
3.9 ha813' RACE 分析验证 ha81 同 odv-e25 的共转录现象 | 第35-36页 |
第四章 结论与讨论 | 第36-39页 |
4.1 结论 | 第36页 |
4.2 讨论 | 第36-39页 |
参考文献 | 第39-43页 |
附录 | 第43-45页 |
致谢 | 第45-46页 |
作者简介 | 第46页 |