| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第11-18页 |
| 第一部分 利用CRISPR/Cas9技术构建prmt3基因敲除的非小细胞肺癌A549细胞株 | 第18-32页 |
| 1 引言 | 第18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 质粒,菌种和细胞株 | 第18页 |
| 2.2 实验材料,试剂和抗体 | 第18-19页 |
| 2.3 实验仪器 | 第19页 |
| 2.4 主要溶剂的配制 | 第19页 |
| 2.5 质粒的构建 | 第19-22页 |
| 2.6 质粒扩增和抽提 | 第22-23页 |
| 2.7 细胞培养,慢病毒包装和感染 | 第23-25页 |
| 2.8 Western blot方法检测 | 第25-28页 |
| 3 结果 | 第28-30页 |
| 3.1 LentiCRISPR-PRMT3-sgRNA成功构建 | 第28页 |
| 3.2 LentiCRISPR-PRMT3-sgRNA慢病毒的成功感染 | 第28-29页 |
| 3.3 PRMT3敲除稳定细胞株的成功构建 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30页 |
| 5 结论 | 第30-32页 |
| 第二部分 prmt3基因敲除对A549细胞增殖和周期的影响 | 第32-44页 |
| 1 引言 | 第32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.2 克隆形成实验 | 第32-33页 |
| 2.3 细胞划痕实验 | 第33页 |
| 2.4 流式细胞技术 | 第33-34页 |
| 2.5 质谱鉴定 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-42页 |
| 3.1 平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力 | 第35-36页 |
| 3.2 平板划痕实验检测细胞迁移能力 | 第36-38页 |
| 3.3 流式细胞技术检测细胞周期变化 | 第38-41页 |
| 3.4 质谱 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 第三部分 YAP精氨酸甲基化修饰的鉴定及其功能的初步研究 | 第44-58页 |
| 1 引言 | 第44-45页 |
| 1.1 YAP的磷酸化 | 第44页 |
| 1.2 YAP的其他翻译后修饰 | 第44-45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第45页 |
| 2.2 细胞总的RNA提取 | 第45页 |
| 2.3 RNA的逆转录 | 第45-46页 |
| 2.4 荧光定量PCR | 第46-47页 |
| 2.5 YAP真核表达载体的构建 | 第47-50页 |
| 2.6 点突变的构建 | 第50-51页 |
| 2.7 多肽的体外激酶反应 | 第51页 |
| 2.8 原核表达纯化YAP蛋白 | 第51-52页 |
| 2.9 体外激酶反应 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-57页 |
| 3.1 质谱结果 | 第52-54页 |
| 3.2 YAP(R124K,R327K,R378K)点突变的Western blot结果 | 第54-55页 |
| 3.3 体外激酶反应 | 第55页 |
| 3.4 Dotblot结果 | 第55-56页 |
| 3.5 YAP(R327K)突变的RT-PCR结果 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附录 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 综述 | 第72-80页 |
| 参考文献 | 第78-80页 |
