| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 符号及英文缩略词与中文对照表 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-25页 |
| 1 水稻纹枯病研究进展 | 第10-17页 |
| 1.1 发生与为害 | 第10页 |
| 1.2 病原物及其致病作用 | 第10-14页 |
| 1.2.1 生物学特性 | 第10-11页 |
| 1.2.2 种类与生理分化 | 第11-12页 |
| 1.2.3 致病因子及作用机理 | 第12-14页 |
| 1.2.3.1 毒素 | 第12-13页 |
| 1.2.3.2 胞壁降解酶 | 第13页 |
| 1.2.3.3 黑色素 | 第13-14页 |
| 1.3 品种抗病性 | 第14-16页 |
| 1.3.1 抗性种质的选育 | 第14-15页 |
| 1.3.2 品种的抗性机理 | 第15-16页 |
| 1.4 防治及存在问题 | 第16-17页 |
| 1.4.1 农业防治措施 | 第16页 |
| 1.4.2 化学防治措施 | 第16-17页 |
| 1.4.3 生物防治措施 | 第17页 |
| 2 植物病原真菌致病基因种类 | 第17-21页 |
| 2.1 与侵染结构形成有关的基因 | 第18页 |
| 2.2 与细胞壁降解有关的基因 | 第18-19页 |
| 2.3 与寄主代谢反应产物有关的基因 | 第19-20页 |
| 2.4 毒素基因 | 第20页 |
| 2.5 与信号传导有关的基因 | 第20页 |
| 2.6 其他功能的致病基因 | 第20-21页 |
| 3 植物病原真菌PG基因研究现状 | 第21-23页 |
| 3.1 真菌胞壁降解酶种类 | 第21页 |
| 3.2 PG基因 | 第21-22页 |
| 3.3 PG基因编码产物及其功能 | 第22-23页 |
| 4 基因的异源表达 | 第23-24页 |
| 4.1 原核表达 | 第23页 |
| 4.2 真核表达 | 第23-24页 |
| 5 选题的目的和意义 | 第24-25页 |
| 材料与方法 | 第25-46页 |
| 1 供试材料 | 第25-29页 |
| 1.1 生物材料 | 第25页 |
| 1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 1.3 仪器 | 第25-26页 |
| 1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 1.5 贮存液配制 | 第27页 |
| 1.6 溶液配制 | 第27-29页 |
| 2 核酸的提取 | 第29-31页 |
| 2.1 基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2 总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.3 质粒的提取 | 第31页 |
| 3 PG基因的克隆与序列分析 | 第31-35页 |
| 3.1 PCR扩增及产物回收 | 第31-33页 |
| 3.2 DH5a感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 3.3 目的片段的连接与转化 | 第33-34页 |
| 3.4 阳性克隆子的筛选与测序 | 第34页 |
| 3.5 PG基因及其表达产物的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3.5.1 PG基因序列分析 | 第34-35页 |
| 3.5.2 PG基因表达产物的生物信息学分析 | 第35页 |
| 4 PG基因的原核表达 | 第35-37页 |
| 4.1 原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 4.1.1 特异性引物设计、PCR扩增及产物回收 | 第35-36页 |
| 4.1.2 目的片段和原核表达载体双酶切及回收纯化 | 第36页 |
| 4.1.3 目的片段与载体的连接、转化、验证与测序 | 第36页 |
| 4.2 BL21感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 4.3 阳性重组质粒转化BL21 | 第36-37页 |
| 4.4 阳性转化子的筛选 | 第37页 |
| 4.5 PG基因的诱导表达 | 第37页 |
| 4.6 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| 5 PG基因的真核表达 | 第37-41页 |
| 5.1 真核表达载体构建 | 第37-39页 |
| 5.1.1 特异性引物设计、PCR扩增及产物回收 | 第37-38页 |
| 5.1.2 目的片段和真核表达载体双酶切及回收纯化 | 第38页 |
| 5.1.3 目的片段与载体的连接、转化、验证与测序 | 第38-39页 |
| 5.2 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 5.3 阳性重组质粒的线性化与转化 | 第39-40页 |
| 5.4 转化子的甲醇利用表型筛选 | 第40页 |
| 5.5 转化子的PCR鉴定 | 第40页 |
| 5.6 外源基因多拷贝整合转化子筛选 | 第40-41页 |
| 5.7 PG基因的诱导表达 | 第41页 |
| 6 表达产物的生物学活性测定 | 第41-43页 |
| 6.1 表达产物的酶活性测定 | 第41-42页 |
| 6.1.1 DNS法测定酶活性 | 第41-42页 |
| 6.1.2 溶解圈法测定酶活性 | 第42页 |
| 6.2 表达产物的致病性测定 | 第42-43页 |
| 6.2.1 针刺接种法 | 第42-43页 |
| 6.2.2 细胞膜损伤测定 | 第43页 |
| 7 PG基因表达水平检测 | 第43-46页 |
| 7.1 qRT-PCR引物设计 | 第43页 |
| 7.2 样品收集与总RNA提取 | 第43-44页 |
| 7.2.1 样品收集 | 第43页 |
| 7.2.2 总RNA提取 | 第43-44页 |
| 7.3 qRT-PCR分析 | 第44-46页 |
| 结果与分析 | 第46-64页 |
| 1 PG基因的克隆 | 第46-49页 |
| 2 生物信息学分析 | 第49-54页 |
| 2.1 PG基因序列分析 | 第49-50页 |
| 2.2 PG基因编码产物的生物信息学分析 | 第50-54页 |
| 2.2.1 PG基因编码产物的一级结构 | 第50-52页 |
| 2.2.2 PG基因编码产物的二级结构 | 第52-54页 |
| 2.2.3 PG基因编码产物的三级结构 | 第54页 |
| 2.2.4 PG基因编码产物的其他生物学特性预测 | 第54页 |
| 3 PG基因的原核表达 | 第54-58页 |
| 4 PG基因的真核表达 | 第58-64页 |
| 4.1 真核表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 4.2 质粒转化及酵母转化子的筛选 | 第60页 |
| 4.3 真核表达产物酶活性测定 | 第60-61页 |
| 4.4 真核表达产物致病性测定 | 第61-62页 |
| 4.4.1 真核表达产物接种水稻叶鞘的致病性测定 | 第61-62页 |
| 4.4.2 真核表达产物对水稻细胞膜的损伤 | 第62页 |
| 4.5 PG基因在病菌侵染过程中的荧光定量PCR分析 | 第62-64页 |
| 讨论 | 第64-67页 |
| 1 PG的结构 | 第64-65页 |
| 2 PG的功能 | 第65-66页 |
| 3 PG的生物学特性 | 第66页 |
| 4 PG基因的异源表达 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-79页 |
| 附录 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第84-85页 |
