| 缩略语表 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| SUMMARY | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 植物休眠特性研究 | 第9页 |
| 1.2 赤霉素调控植物休眠 | 第9-12页 |
| 1.2.1 GID1基因在植物信号传导途径的研究 | 第10-11页 |
| 1.2.2 GID1b基因在植物信号传导途径的研究 | 第11-12页 |
| 1.3 Gateway技术 | 第12-13页 |
| 1.4 酵母单杂交技术 | 第13-14页 |
| 1.5 植物转基因技术 | 第14-16页 |
| 1.5.1 国内外植物转基因技术 | 第14-15页 |
| 1.5.2 马铃薯转基因技术 | 第15-16页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二章 马铃薯GID1s基因家族的筛选 | 第18-30页 |
| 2.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要工具酶和试剂盒 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 马铃薯GID1s家族基因的筛选 | 第19页 |
| 2.2.2 GID1s家族基因序列比对及进化树构建 | 第19页 |
| 2.2.3 马铃薯StGID1b基因启动子序列中顺式作用元件分析 | 第19-20页 |
| 2.2.4 马铃薯GID1s基因表达谱的qRT-PCR分析 | 第20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-28页 |
| 2.3.1 马铃薯GID1s家族基因的鉴定 | 第20-23页 |
| 2.3.2 马铃薯StGID1基因多序列比对及其系统发育进化树构建 | 第23-26页 |
| 2.3.3 StGIDs基因在马铃薯基因组的分布及其结构分析 | 第26-28页 |
| 2.4 马铃薯StGID1s基因在休眠期被打破前后表达量分析 | 第28-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 马铃薯StGID1b基因的克隆及遗传转化 | 第30-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第30-31页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第30页 |
| 3.1.3 工具酶和试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.4 培养基、药品、抗生素的制备 | 第31页 |
| 3.2 马铃薯StGID1b基因的克隆 | 第31-35页 |
| 3.2.1 马铃薯StGID1b基因引物的设计以及合成 | 第31页 |
| 3.2.2 目的基因的克隆及产物的回收 | 第31-32页 |
| 3.2.3 T载体的连接 | 第32-33页 |
| 3.2.4 制备大肠杆菌感受态 | 第33-34页 |
| 3.2.5 转化连接产物 | 第34-35页 |
| 3.2.6 阳性克隆基因的测序及其序列分析 | 第35页 |
| 3.3 马铃薯StGID1b基因过表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.4 马铃薯StGID1b基因的遗传转化 | 第36-37页 |
| 3.4.1 制备农杆菌感受态 | 第36页 |
| 3.4.2 农杆菌介导的马铃薯遗传转化 | 第36-37页 |
| 3.5 转基因植株检测 | 第37-38页 |
| 3.6 结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.6.1 马铃薯StGID1b基因的克隆 | 第38页 |
| 3.6.2 过表达载体pCPB-GID1b的构建 | 第38-39页 |
| 3.6.3 农杆菌介导的马铃薯块茎StGID1b基因的遗传转化 | 第39-40页 |
| 3.6.4 转基因植株检测 | 第40-41页 |
| 3.7 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 马铃薯StGID1b基因干扰表达载体的构建与遗传转化 | 第42-51页 |
| 4.1 材料与方法 | 第42-43页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 4.1.2 菌株和载体 | 第42页 |
| 4.1.3 试剂 | 第42页 |
| 4.1.4 培养基、药品、抗生素的制备 | 第42-43页 |
| 4.2 利用Gateway技术构建马铃薯StGID1b基因干扰表达载体 | 第43-44页 |
| 4.2.1 引物的设计与合成 | 第43页 |
| 4.2.2 干扰基因的PCR扩增与纯化 | 第43-44页 |
| 4.2.3 T载体的连接 | 第44页 |
| 4.2.4 克隆载体转化大肠杆菌感受态 | 第44页 |
| 4.2.5 阳性克隆的测序及分析 | 第44页 |
| 4.3 StGID1b干扰基因入门载体的构建 | 第44-45页 |
| 4.3.1 克隆载体的线性化 | 第44页 |
| 4.3.2 BP反应 | 第44-45页 |
| 4.3.3 工程菌的转化 | 第45页 |
| 4.4 StGID1b基因干扰表达载体的构建 | 第45页 |
| 4.4.1 LR反应 | 第45页 |
| 4.4.2 工程菌的转化 | 第45页 |
| 4.5 马铃薯StGID1b基因干扰表达载体的遗传转化 | 第45-46页 |
| 4.6 结果与分析 | 第46-49页 |
| 4.6.1 马铃薯StGID1b基因干扰片段的克隆 | 第46页 |
| 4.6.2 入门载体pDONR221-StGID1b的构建 | 第46-47页 |
| 4.6.3 表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.6.4 马铃薯pHellsgate8-StGID1b基因的遗传转化 | 第48页 |
| 4.6.5 转基因植株检测 | 第48-49页 |
| 4.7 讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 马铃薯StGID1b启动子区TATC-box元件的鉴定 | 第51-61页 |
| 5.1 材料与方法 | 第51页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 5.1.2 主要试剂、培养基及药品 | 第51页 |
| 5.2 酵母单杂交诱饵载体构建及其自激活活性检测 | 第51-60页 |
| 5.2.1 引物的设计、合成及顺式作用元件的串联重复 | 第51-52页 |
| 5.2.2 pHis2.1载体的双酶切 | 第52-53页 |
| 5.2.3 顺式作用元件与载体的连接 | 第53页 |
| 5.2.4 大肠杆菌转化 | 第53页 |
| 5.2.5 诱饵载体的自激活检测 | 第53-54页 |
| 5.2.6 酵母单杂交报告载体的构建 | 第54-57页 |
| 5.2.7 缺陷培养基筛选 | 第57-58页 |
| 5.2.8 结果与分析 | 第58-60页 |
| 5.3 讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录1 | 第69-70页 |
| 附录2 | 第70-71页 |
| 附录3 | 第71-72页 |
| 附录4 | 第72-73页 |
| 附录5 | 第73-74页 |
| 附录6 | 第74-75页 |
| 附录7 | 第75-76页 |
| 附录8 | 第76-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者介绍 | 第80-81页 |
| 导师简介 | 第81-82页 |
