摘要 | 第8-9页 |
Abstract | 第9页 |
缩略词 | 第10-11页 |
1 前言 | 第11-21页 |
1.1 我国苹果真菌病害的特点 | 第11-12页 |
1.2 果树抗病相关研究进展 | 第12-14页 |
1.2.1 果树免疫机制 | 第12-14页 |
1.2.2 果树抗病机制 | 第14页 |
1.3 苹果ARF家族 | 第14-20页 |
1.3.1 苹果ARF家族的鉴定 | 第14-15页 |
1.3.2 苹果ARF基因家族与苹果发育的关系 | 第15-16页 |
1.3.3 苹果ARF基因家族的外显子和内含子 | 第16-17页 |
1.3.4 苹果ARF基因家族的保守功能域 | 第17-18页 |
1.3.5 苹果ARF基因家族的染色体定位 | 第18-19页 |
1.3.6 苹果ARF基因的功能 | 第19-20页 |
1.4 本研究目的意义 | 第20-21页 |
2 材料和方法 | 第21-35页 |
2.1 试验材料 | 第21-22页 |
2.1.1 植物材料 | 第21页 |
2.1.2 试验试剂 | 第21页 |
2.1.3 培养基配方 | 第21-22页 |
2.2 试验方法 | 第22-35页 |
2.2.1 植物核酸提取与检测 | 第22-23页 |
2.2.2 引物设计 | 第23-24页 |
2.2.3 基因的克隆、鉴定及测序 | 第24-27页 |
2.2.4 序列分析 | 第27页 |
2.2.5 MdARF3-GFP载体的构建 | 第27页 |
2.2.6 MdARF3基因原核表达 | 第27-29页 |
2.2.7 蛋白技术 | 第29-30页 |
2.2.8 酵母双杂交技术 | 第30-31页 |
2.2.9 苹果MdARF3基因植物过表达载体构建 | 第31页 |
2.2.10 农杆菌介导转化苹果 | 第31-32页 |
2.2.11 转基因植株的鉴定 | 第32-33页 |
2.2.12 qRT-PCR检测MdARF3基因在植株中的表达 | 第33页 |
2.2.13 真菌接种实验及统计方法 | 第33-35页 |
3 结果与分析 | 第35-52页 |
3.1 苹果MdARF3基因的克隆与分析 | 第35-41页 |
3.1.1 苹果MdARF3基因编码区序列的克隆与分析 | 第35-36页 |
3.1.2 ARF3同源性及系统发育分析 | 第36-39页 |
3.1.3 MdARF3亚细胞定位 | 第39-40页 |
3.1.4 苹果不同器官中MdARF3基因的相对表达水平分析 | 第40-41页 |
3.2 苹果MdARF3互作蛋白筛选及验证 | 第41-46页 |
3.2.1 苹果MdARF3基因原核表达 | 第41-43页 |
3.2.2 苹果总蛋白提取 | 第43-44页 |
3.2.3 GST Pull-down技术 | 第44页 |
3.2.4 MdARF3与Mal d 1 酵母双杂交实验 | 第44-46页 |
3.3 苹果MdARF3基因的遗传转化分析 | 第46-52页 |
3.3.1 苹果MdARF3基因过表达载体构建及转化农杆菌 | 第46-48页 |
3.3.2 苹果的遗传转化及转基因植株的鉴定 | 第48-49页 |
3.3.3 转基因苹果植株中MdARF3基因和Mal d 1 基因的表达分析 | 第49-50页 |
3.3.4 转基因苹果植株抗病性检测 | 第50-52页 |
4 讨论 | 第52-54页 |
4.1 植物激素与植物感病的关系 | 第52-53页 |
4.2 苹果MdARF3基因与植物感病性的关系 | 第53-54页 |
5 结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-61页 |
附录 | 第61-66页 |
致谢 | 第66-67页 |