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苹果MdARF3基因克隆及功能分析

摘要第8-9页
Abstract第9页
缩略词第10-11页
1 前言第11-21页
    1.1 我国苹果真菌病害的特点第11-12页
    1.2 果树抗病相关研究进展第12-14页
        1.2.1 果树免疫机制第12-14页
        1.2.2 果树抗病机制第14页
    1.3 苹果ARF家族第14-20页
        1.3.1 苹果ARF家族的鉴定第14-15页
        1.3.2 苹果ARF基因家族与苹果发育的关系第15-16页
        1.3.3 苹果ARF基因家族的外显子和内含子第16-17页
        1.3.4 苹果ARF基因家族的保守功能域第17-18页
        1.3.5 苹果ARF基因家族的染色体定位第18-19页
        1.3.6 苹果ARF基因的功能第19-20页
    1.4 本研究目的意义第20-21页
2 材料和方法第21-35页
    2.1 试验材料第21-22页
        2.1.1 植物材料第21页
        2.1.2 试验试剂第21页
        2.1.3 培养基配方第21-22页
    2.2 试验方法第22-35页
        2.2.1 植物核酸提取与检测第22-23页
        2.2.2 引物设计第23-24页
        2.2.3 基因的克隆、鉴定及测序第24-27页
        2.2.4 序列分析第27页
        2.2.5 MdARF3-GFP载体的构建第27页
        2.2.6 MdARF3基因原核表达第27-29页
        2.2.7 蛋白技术第29-30页
        2.2.8 酵母双杂交技术第30-31页
        2.2.9 苹果MdARF3基因植物过表达载体构建第31页
        2.2.10 农杆菌介导转化苹果第31-32页
        2.2.11 转基因植株的鉴定第32-33页
        2.2.12 qRT-PCR检测MdARF3基因在植株中的表达第33页
        2.2.13 真菌接种实验及统计方法第33-35页
3 结果与分析第35-52页
    3.1 苹果MdARF3基因的克隆与分析第35-41页
        3.1.1 苹果MdARF3基因编码区序列的克隆与分析第35-36页
        3.1.2 ARF3同源性及系统发育分析第36-39页
        3.1.3 MdARF3亚细胞定位第39-40页
        3.1.4 苹果不同器官中MdARF3基因的相对表达水平分析第40-41页
    3.2 苹果MdARF3互作蛋白筛选及验证第41-46页
        3.2.1 苹果MdARF3基因原核表达第41-43页
        3.2.2 苹果总蛋白提取第43-44页
        3.2.3 GST Pull-down技术第44页
        3.2.4 MdARF3与Mal d 1 酵母双杂交实验第44-46页
    3.3 苹果MdARF3基因的遗传转化分析第46-52页
        3.3.1 苹果MdARF3基因过表达载体构建及转化农杆菌第46-48页
        3.3.2 苹果的遗传转化及转基因植株的鉴定第48-49页
        3.3.3 转基因苹果植株中MdARF3基因和Mal d 1 基因的表达分析第49-50页
        3.3.4 转基因苹果植株抗病性检测第50-52页
4 讨论第52-54页
    4.1 植物激素与植物感病的关系第52-53页
    4.2 苹果MdARF3基因与植物感病性的关系第53-54页
5 结论第54-55页
参考文献第55-61页
附录第61-66页
致谢第66-67页

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