| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 主要缩写表 | 第9-19页 |
| 1 绪论 | 第19-45页 |
| 1.1 圆红冬孢酵母概述 | 第20-28页 |
| 1.1.1 圆红冬孢酵母的结构特征 | 第20-21页 |
| 1.1.2 圆红冬孢酵母中类胡萝卜素的生产 | 第21-24页 |
| 1.1.3 圆红冬孢酵母其他代谢途径 | 第24-26页 |
| 1.1.4 圆红冬孢酵母的优势 | 第26-27页 |
| 1.1.5 圆红冬孢酵母研究过程中存在的问题 | 第27-28页 |
| 1.2 圆红冬孢酵母遗传工程的研究进展 | 第28-36页 |
| 1.2.1 基因编辑技术的发展 | 第28-32页 |
| 1.2.2 圆红冬孢酵母遗传转化方法 | 第32-34页 |
| 1.2.3 圆红冬孢酵母基因操作策略 | 第34-36页 |
| 1.3 重组技术在遗传操作中的应用 | 第36-43页 |
| 1.3.1 同源重组的应用 | 第36-39页 |
| 1.3.2 位点特异性重组类型 | 第39-42页 |
| 1.3.3 位点特异性重组的应用 | 第42-43页 |
| 1.3.4 位点特异性重组的研究进展 | 第43页 |
| 1.4 本文主要研究思路 | 第43-45页 |
| 2 圆红冬孢酵母同源重组转化系统研究 | 第45-65页 |
| 2.1 引言 | 第45页 |
| 2.2 材料和方法 | 第45-55页 |
| 2.2.1 主要试剂耗材 | 第45-46页 |
| 2.2.2 质粒与菌株 | 第46页 |
| 2.2.3 引物 | 第46页 |
| 2.2.4 培养基 | 第46-49页 |
| 2.2.5 构建靶基因敲除盒的相关分子生物学操作 | 第49-52页 |
| 2.2.6 载体的E.coli转化 | 第52页 |
| 2.2.7 目的基因的酵母基因组整合 | 第52-54页 |
| 2.2.8 酵母基因组的提取 | 第54页 |
| 2.2.9 总类胡萝卜素提取及测定 | 第54-55页 |
| 2.3 结果与分析 | 第55-62页 |
| 2.3.1 带有同源臂的片段转化 | 第55-57页 |
| 2.3.2 农杆菌介导转化同源重组 | 第57-58页 |
| 2.3.3 NP11-△CRT的验证 | 第58-59页 |
| 2.3.4 小分子物质Scr7对同源重组的影响 | 第59-60页 |
| 2.3.5 CRTI基因的功能回补 | 第60-62页 |
| 2.4 讨论 | 第62-64页 |
| 2.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 3 圆红冬孢酵母Cre/loxP重组酶系统的构建 | 第65-78页 |
| 3.1 引言 | 第65-66页 |
| 3.2 材料和方法 | 第66-69页 |
| 3.2.1 菌株及质粒 | 第66-67页 |
| 3.2.2 引物 | 第67-68页 |
| 3.2.3 基因优化 | 第68页 |
| 3.2.4 载体构建 | 第68-69页 |
| 3.2.5 农杆菌介导转化 | 第69页 |
| 3.3 结果与分析 | 第69-76页 |
| 3.3.1 双表达盒载体构建与功能验证 | 第69-72页 |
| 3.3.2 重组酶系统载体的构建及转化 | 第72-75页 |
| 3.3.3 重组酶的农杆菌介导转化的功能验证 | 第75-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-77页 |
| 3.5 本章小结 | 第77-78页 |
| 4 FLP/FRT重组酶系统在R.toruloides中的初步应用 | 第78-102页 |
| 4.1 引言 | 第78页 |
| 4.2 材料与方法 | 第78-86页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第78-81页 |
| 4.2.2 引物 | 第81-82页 |
| 4.2.3 基因优化 | 第82页 |
| 4.2.4 载体构建 | 第82-83页 |
| 4.2.5 重组酶的表达 | 第83-85页 |
| 4.2.6 农杆菌介导重组系统的应用 | 第85-86页 |
| 4.3 结果与分析 | 第86-99页 |
| 4.3.1 重组位点载体的构建与转化 | 第86-87页 |
| 4.3.2 重组酶载体的构建与转化 | 第87-89页 |
| 4.3.3 重组酶的转录水平和翻译水平的分析 | 第89页 |
| 4.3.4 核定位信号分析及载体构建 | 第89-90页 |
| 4.3.5 带有核定位信号的FLP重组酶系统转化功能验证 | 第90-91页 |
| 4.3.6 诱导型启动子FLP酶的载体构建及功能验证 | 第91-93页 |
| 4.3.7 重组酶系统在其他红酵母中的应用 | 第93-96页 |
| 4.3.8 FLP/FRT重组酶系统介导多基因转化 | 第96-99页 |
| 4.4 讨论 | 第99-100页 |
| 4.5 本章小结 | 第100-102页 |
| 5 结论与展望 | 第102-106页 |
| 5.1 结论 | 第102-103页 |
| 5.2 创新点 | 第103页 |
| 5.3 展望 | 第103-106页 |
| 5.3.1 靶基因的定点改造 | 第103-104页 |
| 5.3.2 圆红冬孢酵母类胡萝卜素途径的改造 | 第104页 |
| 5.3.3 圆红冬孢酵母底物利用范围的代谢改造 | 第104页 |
| 5.3.4 位点特异性重组的应用范围 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-117页 |
| 附录1 圆红冬孢酵母密码子偏好性 | 第117-118页 |
| 附录2 本文所用仪器设备 | 第118-119页 |
| 附录3 圆红冬孢酵母中转录因子的核定位分析 | 第119-126页 |
| 附录4 文中所涉及的DNA序列 | 第126-134页 |
| 作者简介 | 第134页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
