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龙眼体胚发生早期的蛋白质组学研究

缩写词第12-15页
摘要第15-18页
Abstract第18-21页
第一章 引言第22-35页
    1 植物体胚发生调控的研究进展第22-24页
        1.1 激素调控植物体胚发生的研究第22-23页
        1.2 植物体胚同步化调控的研究第23-24页
    2 植物体胚发生的基因表达调控研究第24-28页
        2.1 与植物体胚发生有关的看家基因第25页
        2.2 与植物体胚发生有关的激素应答基因第25-26页
        2.3 与植物体胚发生有关的信号转导基因第26页
        2.4 与植物体胚相关的抗氧化胁迫应答基因第26-27页
        2.5 其它与植物体胚发生相关的基因第27-28页
    3 植物体胚发生的蛋白质组学研究进展第28-31页
        3.1 植物蛋白质组学及其研究技术第28-30页
        3.2 植物体胚发生的蛋白质组学研究第30-31页
    4 龙眼体胚发生的蛋白质组学研究第31-32页
    5 本研究的意义和主要内容第32-35页
        5.1 本研究的意义第32-33页
        5.2 本研究的主要内容第33-35页
第二章 龙眼体胚发生早期胚性培养物高分辨率蛋白质双向电泳技术的建立第35-50页
    第一节龙眼体胚发生早期各阶段胚性培养物获取第35-39页
        1 材料与方法第36-37页
            1.1 材料第36页
            1.2 方法第36-37页
                1.2.1 龙眼胚性愈伤组织的继代保持第36-37页
                1.2.2 龙眼体胚发生的同步化调控第37页
                1.2.3 培养条件第37页
        2 结果与分析第37-38页
            2.1 龙眼胚性愈伤组织的长期继代保持第37页
            2.2 龙眼体胚发生早期各阶段材料的同步化培养第37-38页
        3 讨论第38-39页
    第二节龙眼体胚发生早期胚性培养物高分辨率蛋白质双向电泳技术的建立第39-44页
        1 材料与方法第39-41页
            1.1 材料第39页
            1.2 方法第39-41页
                1.2.1 龙眼胚性培养物蛋白样品制备第39-40页
                1.2.2 蛋白定量第40页
                1.2.3 第一向等电聚焦第40页
                1.2.4 第二向SDS-PAGE第40-41页
                1.2.5 凝胶染色第41页
                1.2.6 凝胶扫描与分析第41页
        2 结果与分析第41-44页
            2.1 小型垂直板双向电泳与固相pH 梯度凝胶双向电泳第41-42页
            2.2 IPG 胶条的pH 范围选择第42-43页
            2.3 龙眼不同体胚发育阶段蛋白质双向电泳图谱的比较第43-44页
        3 讨论第44页
    第三节龙眼体胚发生早期胚性培养物蛋白质双向电泳技术的优化第44-50页
        1 材料与方法第44-46页
            1.1 材料第44页
            1.2 方法第44-46页
                1.2.1 龙眼胚性培养物蛋白样品制备第45页
                1.2.2 第一向固相pH 梯度凝胶等电聚焦第45页
                1.2.3 第二向SDS-PAGE第45-46页
                1.2.4 凝胶染色第46页
                1.2.5 凝胶扫描与分析第46页
        2 结果与分析第46-48页
            2.1 不同IPGphor III 运行条件对龙眼胚性培养物蛋白质2D 电泳图谱的影响第46-47页
            2.2 第二向SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶对龙眼胚性培养物蛋白质2D 电泳图谱的影响第47页
            2.3 不同长度的IPG 胶条对龙眼胚性培养物蛋白质2D 电泳图谱分辨率的影响第47-48页
        3 讨论第48-50页
第三章 龙眼体胚发生早期各阶段胚性培养物蛋白质双向电泳分析第50-75页
    1 材料与方法第51-52页
        1.1 材料第51页
        1.2 方法第51-52页
            1.2.1 龙眼体胚发生早期各阶段胚性培养物可溶性蛋白含量测定第51页
            1.2.2 龙眼胚性培养物蛋白样品制备第51页
            1.2.3 双向电泳第51页
            1.2.4 染色第51页
            1.2.5 图像采集和分析第51-52页
    2 结果与分析第52-72页
        2.1 龙眼体胚发生早期各阶段胚性培养物可溶性蛋白质含量变化第52-53页
        2.2 龙眼体胚发生早期各阶段胚性培养物蛋白质双向电泳图谱分析第53-59页
            2.2.1 双向电泳图谱总蛋白点数目变化趋势分析第53-56页
            2.2.2 龙眼体胚发生早期各阶段蛋白点表达情况分析第56-57页
            2.2.3 龙眼体胚发生早期各阶段不同等电点(pI)蛋白点数变化分析第57-58页
            2.2.4 龙眼体胚发生早期各阶段不同分子量(MW)蛋白点数变化分析第58-59页
        2.3 龙眼体胚发生早期各阶段部分差异表达蛋白分析第59-71页
        2.4 进行质谱鉴定蛋白点表达丰度分析第71-72页
    3 讨论第72-75页
        3.1 龙眼体胚发生早期蛋白质组学研究的重要性第72-73页
        3.2 龙眼体胚发生早期是体胚发育的决定性时期第73页
        3.3 龙眼体胚发生早期过程的关键阶段第73-74页
        3.4 龙眼体胚发生早期蛋白质差异或特异表达是基因网络调控的结果第74-75页
第四章 龙眼体胚发生早期各阶段部分差异表达蛋白质的质谱分析第75-94页
    1 材料与方法第75-77页
        1.1 材料第75页
        1.2 方法第75-77页
            1.2.1 蛋白质的MALDI-TOF 质谱分析第76页
            1.2.2 蛋白质的数据库检索第76-77页
    2 结果与分析第77-91页
        2.1 龙眼体胚发生早期各阶段胚性培养物部分蛋白点的质谱鉴定第77-84页
            2.1.1 蛋白质的质谱鉴定第77-82页
            2.1.2 蛋白质鉴定质谱图分析第82-84页
        2.2 龙眼体胚发生早期主要功能群蛋白质分析第84-91页
            2.2.1 能量和糖代谢相关蛋白第84-86页
            2.2.2 信号转导与细胞凋亡有关的蛋白第86-87页
            2.2.3 调控相关蛋白第87-88页
            2.2.4 胁迫反应和防御相关的蛋白第88-90页
            2.2.5 细胞结构蛋白第90页
            2.2.6 蛋白质合成、折叠、组装和分解相关蛋白第90-91页
    3 讨论第91-94页
        3.1 能量代谢和糖代谢是龙眼体胚发生的基础第91-92页
        3.2 胁迫反应是龙眼体胚发生的先决条件第92-93页
        3.3 从蛋白质水平解释龙眼体胚发生早期基因表达第93-94页
第五章 龙眼体胚发生早期部分相关蛋白基因的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析第94-159页
    第一节 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP合酶β亚基基因克隆及其在龙眼体胚发生过程中表达第95-106页
        1 材料与方法第96-98页
            1.1 材料第96页
            1.2 方法第96-98页
                1.2.1 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因保守区序列克隆第96页
                1.2.2 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因3'端序列克隆第96-97页
                1.2.3 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因5′端序列克隆第97页
                1.2.4 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因全长开放阅读框(ORF)的克隆第97页
                1.2.5 PCR 产物回收与测序第97-98页
                1.2.6 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因序列拼接及生物信息学分析第98页
                1.2.7 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因在龙眼体胚发育不同阶段的表达第98页
        2 结果与分析第98-104页
            2.1 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因序列的克隆第98-99页
            2.2 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因测序结果与序列分析第99-100页
            2.3 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因编码蛋白理化性质与结构特征分析第100-101页
            2.4 从线粒体ATP 合酶β亚基基因序列分支图看龙眼在生物界中的系统位置第101-102页
            2.5 龙眼体胚不同发育阶段胚性培养物中线粒体ATP 合酶β亚基基因的转录水平分析第102-104页
        3 讨论第104-106页
            3.1 龙眼线粒体ATP 合酶β亚基基因类型及其蛋白质导肽的确定第104-105页
            3.2 线粒体ATP 合酶基因与龙眼体胚发生的关系第105-106页
            3.3 线粒体ATP 合酶β亚基基因在生物系统进化研究上的价值第106页
    第二节 龙眼胚性愈伤组织磷酸丙糖异构酶基因克隆及其在龙眼体胚发生过程中表达第106-121页
        1 材料与方法第107-109页
            1.1 材料第107页
            1.2 方法第107-109页
                1.2.1 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因保守区序列克隆第107页
                1.2.2 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因3'端序列克隆第107-108页
                1.2.3 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因5′端序列克隆第108页
                1.2.4 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因全长开放阅读框(ORF)的克隆第108页
                1.2.5 龙眼胚性愈伤组织2 个类型TPI 基因克隆第108-109页
                1.2.6 PCR 产物回收与测序第109页
                1.2.7 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因序列拼接及生物信息学分析第109页
                1.2.8 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因在龙眼体胚发育不同阶段的表达第109页
        2 结果与分析第109-120页
            2.1 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因2 个类型序列的克隆第109-111页
            2.2 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因2 个类型测序结果与序列分析第111-115页
            2.3 龙眼胚性愈伤组织TPI 基因编码蛋白理化性质与结构特征分析第115-117页
                2.3.1 TPI 基因类型I(TPI_I)编码蛋白TPI_I第115-116页
                2.3.2 TPI 基因类型I(TPI_II)编码蛋白TPI_II第116-117页
            2.4 从TPI_I 和TPI_II 基因序列推导的氨基酸序列分支图看龙眼在生物界中的系统位置第117-118页
            2.5 龙眼体胚不同发育阶段胚性培养物中TPI 基因的转录水平分析第118-120页
        3 讨论第120-121页
            3.1 龙眼2 个TPI 基因类型的确定第120页
            3.2 龙眼TPI 基因与龙眼体胚发生的关系第120-121页
            3.3 龙眼 TPI 基因在生物进化上的利用价值第121页
    第三节 龙眼体胚发生早期胚性培养物未知蛋白DlUP-3 基因(Dimocarpus longan unknown protein 3)克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达第121-133页
        1 材料与方法第121-123页
            1.1 材料第121页
            1.2 方法第121-123页
                1.2.1 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因保守区序列克隆第121-122页
                1.2.2 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因3'端序列克隆第122页
                1.2.3 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因5′端序列克隆第122页
                1.2.4 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因全长开放阅读框(ORF)的克隆第122页
                1.2.5 PCR 产物回收与测序第122-123页
                1.2.6 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因序列拼接及生物信息学分析第123页
                1.2.7 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因在龙眼体胚发育不同阶段的表达第123页
        2 结果与分析第123-132页
            2.1 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因序列的克隆第123-124页
            2.2 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因测序结果与序列分析第124-125页
            2.3 龙眼胚性培养物DlUP-3 蛋白理化性质与结构特征分析第125-129页
                2.3.1 龙眼胚性培养物DlUP-3 蛋白质理化性质预测分析第125页
                2.3.2 龙眼胚性培养物DlUP-3 蛋白同源蛋白质家族比较分析第125-126页
                2.3.3 龙眼胚性培养物DlUP-3 蛋白亚细胞定位、信号肽和跨膜结构的预测第126-127页
                2.3.4 龙眼胚性培养物DlUP-3 蛋白二级结构预测第127-128页
                2.3.5 龙眼胚性培养物DlUP-3 蛋白磷酸化位点的预测分析第128页
                2.3.6 龙眼胚性培养物DlUP-3 蛋白功能位点分析第128-129页
                2.3.7 龙眼胚性培养物DlUP-3 蛋白保守结构域与功能域分析第129页
            2.4 龙眼体胚不同发育阶段胚性培养物中DlUP-3 基因的转录水平分析第129-132页
        3 讨论第132-133页
            3.1 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因的推测功能及其在龙眼体胚发生早期的作用第132页
            3.2 龙眼胚性培养物DlUP-3 基因与龙眼体胚发生的关系第132-133页
            3.3 龙眼胚性培养物未知功能蛋白基因克隆的重要性第133页
    第四节 龙眼体胚发生早期胚性培养物未知蛋白DlUP-4 基因(Dimocarpus longan unknown protein 4)克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达第133-143页
        1 材料与方法第133-135页
            1.1 材料第133页
            1.2 方法第133-135页
                1.2.1 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因保守区序列克隆第133-134页
                1.2.2 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因3'端序列克隆第134页
                1.2.3 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因5′端序列克隆第134页
                1.2.4 龙眼胚性培养物DlUP-4基因全长开放阅读框(ORF)的克隆第134页
                1.2.5 PCR 产物回收与测序第134页
                1.2.6 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因序列拼接及生物信息学分析第134-135页
                1.2.7 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因在龙眼体胚发育不同阶段的表达第135页
        2 结果与分析第135-143页
            2.1 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因序列的克隆第135页
            2.2 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因测序结果与序列分析第135-136页
            2.3 龙眼胚性培养物DlUP-4 蛋白理化性质与结构特征分析第136-140页
                2.3.1 龙眼胚性培养物DlUP-4 蛋白质理化性质预测与分析第137页
                2.3.2 龙眼胚性培养物DlUP-4 蛋白质同源蛋白质家族比较分析第137页
                2.3.3 龙眼胚性培养物DlUP-4 蛋白亚细胞定位、信号肽和跨膜结构的预测第137-138页
                2.3.4 龙眼胚性培养物DlUP-4 蛋白二级结构预测第138-139页
                2.3.5 龙眼胚性培养物DlUP-4 蛋白磷酸化位点的预测分析第139-140页
                2.3.6 龙眼胚性培养物DlUP-4 蛋白功能位点分析第140页
                2.3.7 龙眼胚性培养物DlUP-4 蛋白保守结构域与功能域分析第140页
            2.4 龙眼体胚不同发育阶段胚性培养物中DlUP-4 基因的转录水平分析第140-143页
        3 讨论第143页
            3.1 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因推断的功能第143页
            3.2 龙眼胚性培养物DlUP-4 基因与龙眼体胚发生的关系第143页
    第五节龙眼体胚发生早期胚性培养物未知蛋白DlUP-5 基因(Dimocarpus longan unknown protein 5)克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达第143-153页
        1 材料与方法第144-145页
            1.1 材料第144页
            1.2 方法第144-145页
                1.2.1 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因保守区序列克隆第144页
                1.2.2 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因3'端序列克隆第144页
                1.2.3 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因5′端序列克隆第144页
                1.2.4 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因全长开放阅读框(ORF)的克隆第144-145页
                1.2.5 PCR 产物回收与测序第145页
                1.2.6 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因序列拼接及生物信息学分析第145页
                1.2.7 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因在龙眼体胚发育不同阶段的表达第145页
        2 结果与分析第145-153页
            2.1 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因序列的克隆第145-146页
            2.2 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因测序结果与序列分析第146-147页
            2.3 龙眼胚性培养物DlUP-5 蛋白理化性质与结构特征分析第147-151页
                2.3.1 龙眼胚性培养物DlUP-5 蛋白质理化性质预测与分析第147页
                2.3.2 龙眼胚性培养物DlUP-5 蛋白同源蛋白质家族比较分析第147-148页
                2.3.3 龙眼胚性培养物DlUP-5 蛋白亚细胞定位、信号肽和跨膜结构的预测第148-149页
                2.3.4 龙眼胚性培养物DlUP-5 蛋白二级结构预测第149页
                2.3.5 龙眼胚性培养物DlUP-5 蛋白磷酸化位点的预测分析第149-150页
                2.3.6 龙眼体胚DlUP-5 蛋白功能位点分析第150页
                2.3.7 龙眼体胚DlUP-5 蛋白保守结构域与功能域分析第150-151页
            2.4 龙眼体胚不同发育阶段胚性培养物中DlUP-5 基因的转录水平分析第151-153页
        3 讨论第153页
            3.1 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因功能的推断第153页
            3.2 龙眼胚性培养物DlUP-5 基因与龙眼体胚发生的关系第153页
    第六节 龙眼体胚发生早期胚性培养物未知蛋白DlUP-6 和DlUP-7 基因克隆第153-159页
        1 材料与方法第154-155页
            1.1 材料第154页
            1.2 方法第154-155页
                1.2.1 龙眼胚性培养物DlUP-6 基因保守区序列克隆第154页
                1.2.2 龙眼胚性培养物DlUP-6 基因3'端序列克隆第154页
                1.2.3 龙眼胚性培养物DlUP-7 基因保守区序列克隆第154-155页
                1.2.4 龙眼胚性培养物DlUP-7 基因3'端序列克隆第155页
                1.2.5 PCR 产物回收与测序第155页
                1.2.6 龙眼胚性培养物DlUP-6 和DlUP-7 基因部分序列拼接及生物信息学分析第155页
        2 结果与分析第155-158页
            2.1 龙眼胚性培养物DlUP-6 和DlUP-7 基因部分cDNA 片段的克隆第155-156页
                2.1.1 龙眼胚性培养物DlUP-6基因部分cDNA片段克隆第155页
                2.1.2 龙眼胚性培养物DlUP-7基因部分cDNA片段克隆第155-156页
            2.2 龙眼胚性培养物DlUP-6 基因和DlUP-7 基因部分cDNA 片段的测序结果与序列分析第156-158页
                2.2.1 DlUP-6 基因第156-157页
                2.2.2 DlUP-7 基因第157-158页
        3 讨论第158-159页
            3.1 龙眼体胚发生早期胚性培养物DlUP-6 基因功能的推断第158页
            3.2 龙眼体胚发生早期胚性培养物DlUP-7 基因功能预测第158页
            3.3 龙眼体胚发生早期胚性培养物未知蛋白克隆第158-159页
第六章 小结第159-165页
    1 建立龙眼体胚发生早期胚性培养物高分辨率双向电泳技术第159-160页
    2 龙眼体胚发生早期各阶段蛋白质双向电泳分析第160-161页
        2.1 龙眼体胚发生早期各阶段可溶性蛋白与蛋白质数目的变化第160页
        2.2 龙眼体胚发生早期各阶段蛋白质等电点(pI)和分子量(MW)的变化第160-161页
        2.3 龙眼体胚发生早期各阶段蛋白质的差异表达第161页
    3 龙眼体胚发生早期各阶段部分差异蛋白的质谱鉴定和相关蛋白质的功能第161-162页
    4 龙眼体细胞胚胎发生早期部分相关蛋白基因的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析第162-165页
        4.1 龙眼胚性愈伤组织线粒体ATP 合酶β亚基基因克隆及其表达分析第162页
        4.2 龙眼胚性愈伤组织磷酸丙糖异构酶基因克隆及其表达分析第162-163页
        4.3 龙眼体胚未知蛋白及未知功能蛋白基因克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析第163-165页
参考文献第165-180页
附录 Ⅰ第180-229页
附录 Ⅱ第229-236页
附录 Ⅲ第236-259页
附录 Ⅳ第259-274页
博士学习期间发表的论文第274-276页
致谢第276页

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