| 摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 目录 | 第15-18页 |
| 缩写词中英文对照 | 第18-20页 |
| 前言 | 第20-23页 |
| 第一章 H19、miR-675-5p在食管鳞癌组织及细胞中的表达及意义 | 第23-42页 |
| 1.1 前言 | 第23-24页 |
| 1.2 材料与方法 | 第24-32页 |
| 1.2.1 实验材料与试剂 | 第24-27页 |
| 1.2.1.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 1.2.1.2 实验试剂 | 第26-27页 |
| 1.2.2 方法 | 第27-30页 |
| 1.2.2.1 组织及细胞总RNA的提取(含miRNA) | 第27-28页 |
| 1.2.2.2 逆转录反应 | 第28-29页 |
| 1.2.2.3 实时荧光定量PCR | 第29-30页 |
| 1.2.2.4 采用2~(-△△Ct)法进行数据分析 | 第30页 |
| 1.2.3 统计学处理 | 第30-32页 |
| 1.3 结果 | 第32-38页 |
| 1.3.1. 组织标本及细胞系总RNA提取鉴定 | 第32页 |
| 1.3.2. 实时荧光定量PCR检测H19及miR-675-5p在食管鳞癌组织中的表达 | 第32-35页 |
| 1.3.3. 实时荧光定量PCR检测H19及miR-675-5p在食管鳞癌细胞系中的表达 | 第35-36页 |
| 1.3.4. miR-675-5p及H19的相对表达与临床病理特征之间的相关性分析 | 第36-38页 |
| 1.4 讨论 | 第38-41页 |
| 1.5 结论 | 第41-42页 |
| 第二章 miR-675-5p在食管鳞癌细胞中的功能分析及靶基因的验证 | 第42-83页 |
| 2.1 前言 | 第42-43页 |
| 2.2 材料与方法 | 第43-64页 |
| 2.2.1. 实验材料与试剂 | 第43-44页 |
| 2.2.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 2.2.1.2 实验试剂 | 第43-44页 |
| 2.2.2 方法 | 第44-63页 |
| 2.2.2.1 miR-675慢病毒载体的构建和包装 | 第44-53页 |
| 2.2.2.2 细胞转染 | 第53-56页 |
| 2.2.2.3 miR-675-5p在食管鳞癌细胞中的功能分析-体外试验 | 第56-59页 |
| 2.2.2.4 miR-675-5p在食管鳞癌细胞中的功能分析-体内裸鼠致瘤实验 | 第59页 |
| 2.2.2.5 miR-675-5p调控靶基因的预测、鉴定及验证 | 第59-63页 |
| 2.2.3 统计学处理 | 第63-64页 |
| 2.3 结果 | 第64-78页 |
| 2.3.1. miR-675慢病毒载体的测序及滴度检测报告 | 第64-66页 |
| 2.3.2. 慢病毒瞬时转染目的细胞结果 | 第66-68页 |
| 2.3.3. LV-miR-675-precursor稳定转染Eca109细胞株的建立 | 第68-69页 |
| 2.3.4. miR-675-5p在食管鳞癌细胞中的功能分析 | 第69-78页 |
| 2.3.4.1 miR-675-5p对食管鳞癌细胞增殖的影响 | 第69-71页 |
| 2.3.4.2 miR-675-5p对食管鳞癌细胞凋亡的影响 | 第71-72页 |
| 2.3.4.3 miR-675-5p对食管鳞癌细胞周期的影响 | 第72-74页 |
| 2.3.4.4 miR-675-5p对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第74-76页 |
| 2.3.4.5 miR-675-5p对食管鳞癌细胞裸鼠致瘤的影响 | 第76-77页 |
| 2.3.4.6 双荧光素酶报告基因实验分析 | 第77-78页 |
| 2.4 讨论 | 第78-82页 |
| 2.5 结论 | 第82-83页 |
| 第三章 miR-675-5p对食管鳞癌细胞Ras/Ral细胞通路的影响 | 第83-98页 |
| 3.1 前言 | 第83-84页 |
| 3.2 材料与方法 | 第84-90页 |
| 3.2.1. 实验材料与试剂 | 第84-86页 |
| 3.2.1.1 实验材料 | 第84页 |
| 3.2.1.2 实验试剂 | 第84-86页 |
| 3.2.2. 方法 | 第86-89页 |
| 3.2.2.1 慢病毒感染目的细胞 | 第86页 |
| 3.2.2.2 实时荧光定量PCR检测转染食管癌细胞后REPS2 mRNA的表达 | 第86页 |
| 3.2.2.3 Western免疫印迹分析靶基因及相关信号蛋白的变化 | 第86-89页 |
| 3.2.3. 统计学处理 | 第89-90页 |
| 3.3 结果 | 第90-93页 |
| 3.3.1 实时荧光定量PCR分析miR-675-5p对REPS2 mRNA表达水平的影响 | 第90-91页 |
| 3.3.2. Western免疫印迹检测miR-675-5p对REPS2蛋白表达水平的影响 | 第91页 |
| 3.3.3. Western免疫印迹检测miR-675-5p对Ras/Ral信号通路相关蛋白的影响 | 第91-93页 |
| 3.4 讨论 | 第93-97页 |
| 3.5 结论 | 第97-98页 |
| 第四章 靶基因REPS2在食管鳞癌中的表达及意义 | 第98-116页 |
| 4.1 前言 | 第98-99页 |
| 4.2 材料与方法 | 第99-103页 |
| 4.2.1. 实验材料与试剂 | 第99-100页 |
| 4.2.1.1 实验材料 | 第99-100页 |
| 4.2.1.2 实验试剂 | 第100页 |
| 4.2.2. 方法 | 第100-102页 |
| 4.2.2.1 实时荧光定量PCR检测食管癌组织及细胞中REPS2 mRNA的表达 | 第100页 |
| 4.2.2.2 Western免疫印迹检测食管癌组织及细胞中REPS2蛋白的表达 | 第100页 |
| 4.2.2.3 免疫组织化学方法检测食管癌组织中REPS2蛋白的表达 | 第100-102页 |
| 4.2.3. 统计学处理 | 第102-103页 |
| 4.3 结果 | 第103-112页 |
| 4.3.1. 实时荧光定量PCR检测食管癌组织中REPS2 mRNA的表达 | 第103-104页 |
| 4.3.2. 实时荧光定量PCR检测食管癌细胞中REPS2 mRNA的表达 | 第104页 |
| 4.3.3. Western免疫印迹检测食管癌组织中REPS2蛋白的表达 | 第104-105页 |
| 4.3.4. Western免疫印迹检测食管癌细胞中REPS2蛋白的表达 | 第105页 |
| 4.3.5. 免疫组织化学检测食管癌组织中REPS2蛋白的表达 | 第105-107页 |
| 4.3.6. REPS2蛋白的相对表达与临床病理特征之间的相关性分析 | 第107-108页 |
| 4.3.7. 食管鳞癌组织中REPS2蛋白的相对表达与患者预后之间的关系 | 第108-112页 |
| 4.4 讨论 | 第112-115页 |
| 4.5 结论 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-125页 |
| 综述 H19基因的研究进展 | 第125-143页 |
| 参考文献 | 第134-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第144页 |
