| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第14-33页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第14页 |
| 1.2 国内外研究综述 | 第14-31页 |
| 1.2.1 生物农药的应用及作用机制 | 第14-18页 |
| 1.2.2 益生菌对植物抗性诱导的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.2.3 真菌中的 Cerato-Platanin 蛋白类群 | 第22-23页 |
| 1.2.4 丝状真菌独有的疏水蛋白 | 第23-26页 |
| 1.2.5 基因敲除及其在丝状真菌转化上的应用 | 第26-31页 |
| 1.3 课题来源及主要研究内容 | 第31-33页 |
| 1.3.1 课题来源 | 第31页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第31-33页 |
| 第2章 材料与方法 | 第33-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 培养基 | 第33-34页 |
| 2.1.3 试剂和酶 | 第34-35页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第35-36页 |
| 2.1.5 实验主要仪器 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-48页 |
| 2.2.1 EplT4 和 EplW7 基因的克隆 | 第36-37页 |
| 2.2.2 棘孢木霉 T4 和球毛壳菌 W7 的 cDNA 合成 | 第37页 |
| 2.2.3 EplT4 和 EplW7 毕赤酵母表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.4 pPIC9K-EplT4 和 pPIC9K-EplW7 转化毕赤酵母 | 第39页 |
| 2.2.5 pPIC9K-EplT4 和 pPIC9K-EplW7 毕赤酵母转化子的筛选 | 第39-40页 |
| 2.2.6 重组 EplT4 和 EplW7 发酵条件优化 | 第40-41页 |
| 2.2.7 重组 EplT4 蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.8 响应面法优化毕赤酵母表达 EplT4 和 EplW7 发酵条件 | 第42页 |
| 2.2.9 重组 EplT4 蛋白的特性分析 | 第42页 |
| 2.2.10 农杆菌介导丝状真菌转化 | 第42-43页 |
| 2.2.11 木霉和毛壳菌转化子的验证 | 第43页 |
| 2.2.12 真菌在大豆根部的定殖检测 | 第43-44页 |
| 2.2.13 真菌对大豆的诱导抗性检测 | 第44页 |
| 2.2.14 构建 pHIS2-靶 DNA 重组报告载体 | 第44-45页 |
| 2.2.15 pHIS2-EplT4 和 pHIS2-EplW7 的 3-AT 浓度的选择 | 第45页 |
| 2.2.16 棘孢木霉和球毛壳菌 cDNA 文库的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.17 重组报告载体与真菌 cDNA 文库共转化酿酒酵母 | 第46-47页 |
| 2.2.18 阳性克隆的互作分析 | 第47-48页 |
| 第3章 免疫诱导蛋白在毕赤酵母中的表达及其诱导抗性 | 第48-81页 |
| 3.1 EPLT4 和 EPLW7 基因的克隆 | 第49-52页 |
| 3.1.1 棘孢木霉抗性诱导因子（EplT4）基因基隆 | 第49-50页 |
| 3.1.2 球毛壳菌抗性诱导因子（EplW7）基因克隆 | 第50-51页 |
| 3.1.3 EplT4 和 EplW7 序列分析 | 第51-52页 |
| 3.2 毕赤酵母抗性诱导因子转化子鉴定 | 第52-57页 |
| 3.2.1 EplT4 的毕赤酵母转化子的鉴定 | 第52-55页 |
| 3.2.2 EplW7 毕赤酵母转化子的鉴定 | 第55-57页 |
| 3.3 毕赤酵母抗性诱导因子发酵条件优化 | 第57-70页 |
| 3.3.1 毕赤酵母转化子 Ppa-EplT4 发酵条件优化 | 第57-63页 |
| 3.3.2 毕赤酵母转化子 Ppa-EplW7 发酵条件优化 | 第63-70页 |
| 3.4 重组 EPLT4 蛋白的纯化和特性研究 | 第70-80页 |
| 3.4.1 Ppa-EplT4 的高密度发酵 | 第70-72页 |
| 3.4.2 重组 EplT4 的纯化 | 第72-73页 |
| 3.4.3 重组 EplT4 的活性检测 | 第73-80页 |
| 3.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第4章 免疫诱导蛋白基因功能的研究 | 第81-115页 |
| 4.1 棘孢木霉 EPLT4 基因功能的分析 | 第81-98页 |
| 4.1.1 EplT4 基因在棘孢木霉中的表达 | 第82页 |
| 4.1.2 EplT4 过表达体和基因缺失体的构建 | 第82-89页 |
| 4.1.3 EplT4 对棘孢木霉的影响 | 第89-93页 |
| 4.1.4 EplT4 对棘孢木霉诱导植物抗性的影响 | 第93-98页 |
| 4.2 球毛壳菌 EPLW7 基因功能的分析 | 第98-113页 |
| 4.2.1 EplW7 基因在球毛壳菌中的表达 | 第98-99页 |
| 4.2.2 EplW7 过表达体和基因缺失体的构建 | 第99-105页 |
| 4.2.3 EplW7 对球毛壳菌的影响 | 第105-108页 |
| 4.2.4 EplW7 对球毛壳诱导植物抗性的影响 | 第108-113页 |
| 4.3 本章小结 | 第113-115页 |
| 第5章 免疫诱导蛋白基因调控研究 | 第115-124页 |
| 5.1 PHIS2-EPLT4 和 PHIS2-EPLW7 重组报告载体的获得 | 第115页 |
| 5.2 棘孢木霉 T4 和球毛壳菌 W7 CDNA 文库的构建 | 第115-116页 |
| 5.3 棘孢木霉和球毛壳菌文库质量的鉴定 | 第116-117页 |
| 5.4 报告载体的 3-AT 浓度选择 | 第117-118页 |
| 5.5 报告质粒与文库的互作筛选 | 第118页 |
| 5.6 EPL 反式作用因子的筛选 | 第118-123页 |
| 5.7 本章小结 | 第123-124页 |
| 结论 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-141页 |
| 附录 | 第141-145页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第145-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 个人简历 | 第149页 |
