| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 1,3-丙二醇 | 第10页 |
| 1.1.1 1,3-丙二醇的化学合成 | 第10页 |
| 1.1.2 1,3-丙二醇的生物法合成 | 第10页 |
| 1.2 克雷伯氏肺炎杆菌 | 第10-11页 |
| 1.2.1 甘油代谢途径 | 第11页 |
| 1.3 主要副产物 | 第11-15页 |
| 1.3.1 乙酸 | 第11-12页 |
| 1.3.2 乳酸 | 第12-13页 |
| 1.3.3 2,3-丁二醇 | 第13-14页 |
| 1.3.4 bud操纵子 | 第14-15页 |
| 1.4 1,3-丙二醇生产菌株的代谢工程研究 | 第15-17页 |
| 1.4.1 E.coli的基因工程改造 | 第16页 |
| 1.4.2 除去K.pneumoniae中甘油代谢副产物 | 第16-17页 |
| 1.4.3 过表达K.pneumoniae中甘油还原途径关键酶 | 第17页 |
| 1.4.4 K.pneumoniae中还原途径酶的定向进化 | 第17页 |
| 1.5 同源重组技术 | 第17-21页 |
| 1.6 Red同源重组技术辅助质粒 | 第21-22页 |
| 1.6.1 pKD46质粒 | 第21页 |
| 1.6.2 pKD4质粒 | 第21-22页 |
| 1.6.3 pCP20质粒 | 第22页 |
| 1.7 本课题研究内容及意义 | 第22-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-40页 |
| 2.1 材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 引物 | 第24-26页 |
| 2.1.3 分子生物学试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 化学试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5 培养基及抗生素 | 第27-28页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.7 应用软件及程序 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 微生物培养 | 第29页 |
| 2.2.2 菌种保藏 | 第29页 |
| 2.2.3 PCR扩增目的片段 | 第29-30页 |
| 2.2.4 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.2.5 PCR产物回收 | 第31页 |
| 2.2.6 TA克隆 | 第31页 |
| 2.2.7 DH5α感受态制备 | 第31-32页 |
| 2.2.8 化转 | 第32页 |
| 2.2.9 质粒抽提 | 第32-33页 |
| 2.2.10 DNA的酶切 | 第33页 |
| 2.2.11 DNA的连接 | 第33页 |
| 2.2.12 K.pneumoniae的电转化 | 第33-34页 |
| 2.2.13 阳性克隆的筛选 | 第34页 |
| 2.2.14 发酵 | 第34-35页 |
| 2.3 发酵液分析 | 第35-40页 |
| 2.3.1 GC分析 | 第35-37页 |
| 2.3.2 HPLC分析 | 第37-40页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第40-60页 |
| 3.1 突变株KG1-1和KG1-2的构建 | 第40-48页 |
| 3.1.1 K.pneumoniae/pKD46-Tc菌株的筛选 | 第41-43页 |
| 3.1.2 两步PCR法扩增打靶片段 | 第43-45页 |
| 3.1.3 IdhA和dld的基因敲除 | 第45-46页 |
| 3.1.4 卡那抗性的消除 | 第46-48页 |
| 3.2 KG1-1和KG1-2的代谢分析 | 第48-50页 |
| 3.3 bud操纵子的分析 | 第50-53页 |
| 3.3.1 bud操纵子的基因序列分析 | 第50-53页 |
| 3.4 2,3-丁二醇不产菌株的构建 | 第53-58页 |
| 3.4.1 KG1-3的代谢分析 | 第56-58页 |
| 3.5 KG1-5的构建 | 第58-60页 |
| 3.5.1 乳酸敲除对KG1-5发酵生产1,3-丙二醇的影响 | 第58-60页 |
| 第4章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 4.1 结论 | 第60页 |
| 4.2 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
