| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 实验技术路线 | 第14-16页 |
| 第一部分 ADAM23基因对肺腺癌细胞SPC-A-1浸润和转移的影响及其与EMT、fascin1关系的研究 | 第16-51页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第19-25页 |
| 1.1.1 肺癌细胞株 | 第19页 |
| 1.1.2 质粒 | 第19页 |
| 1.1.3 主要实验抗体 | 第19-20页 |
| 1.1.4 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 1.1.5 主要实验试剂 | 第21页 |
| 1.1.6 主要实验试剂盒 | 第21页 |
| 1.1.7 实验常用工作液配制 | 第21-25页 |
| 1.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第25-26页 |
| 1.2.2 细胞转染 | 第26页 |
| 1.2.3 抗生素G418浓度筛选 | 第26-27页 |
| 1.2.4 G418筛选阳性克隆 | 第27页 |
| 1.2.5 细胞总蛋白提取 | 第27页 |
| 1.2.6 BCA法测定蛋白浓度 | 第27-28页 |
| 1.2.7 Western blot | 第28-30页 |
| 1.2.8 Real time PCR | 第30-34页 |
| 1.2.9 Traswell体外迁移实验 | 第34-35页 |
| 1.2.10 Traswell体外侵袭实验 | 第35-36页 |
| 1.3 统计学处理 | 第36-37页 |
| 2 结果 | 第37-46页 |
| 2.1 Western blot验证SPC-A-1细胞中ADAM23蛋白的表达 | 第37页 |
| 2.2 瞬时转染干扰质粒ADAM23检测ADAM23表达水平 | 第37-39页 |
| 2.2.1 ADAM23-shRNA瞬时转染效率 | 第37-38页 |
| 2.2.2 Real time PCR验证ADAM23-shRNA瞬时转染后ADAM23 mRNA表达 | 第38页 |
| 2.2.3 Western blot验证ADAM23-shRNA瞬时转染后ADAM23蛋白表达 | 第38-39页 |
| 2.3 稳定抑制ADAM23表达的肺腺癌细胞SPC-A-1细胞克隆的建立 | 第39-41页 |
| 2.3.1 G418筛选细胞和克隆形成 | 第39-40页 |
| 2.3.2 Real time PCR验证抑制ADAM23表达的阳性细胞克隆 | 第40-41页 |
| 2.3.3 Western blot验证抑制ADAM23表达的阳性细胞克隆 | 第41页 |
| 2.4 Western blot验证抑制ADAM23表达阳性细胞克隆中TWIST、E-cadherin、vimentin、α-SMA蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 2.5 稳定抑制ADAM23表达阳性细胞克隆中fascin1的表达 | 第42-43页 |
| 2.5.1 Real time PCR验证抑制ADAM23表达的阳性细胞克隆fascin1 mRNA表达 | 第42-43页 |
| 2.5.2 Western blot验证抑制ADAM23表达的阳性细胞克隆fascin1蛋白表达 | 第43页 |
| 2.6 Transwell小室测定抑制ADAM23表达阳性细胞克隆的迁移能力 | 第43-44页 |
| 2.7 Transwell小室测定抑制ADAM23表达阳性细胞克隆的侵袭能力 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-50页 |
| 3.1 ADAM23低表达增强肺腺癌的浸润转移能力 | 第46-47页 |
| 3.2 ADAM23表达下调可通过上调TWIST,诱导EMT的发生促进肺腺癌的浸润转移 | 第47-48页 |
| 3.3 ADAM23低表达介导的肺腺癌浸润转移可能和fascin1相关 | 第48-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 第二部分 稳定抑制ADAM23表达肺腺癌细胞SPC-A-1中miRNA表达谱的研究 | 第51-63页 |
| 前言 | 第51-52页 |
| 1 材料与方法 | 第52-56页 |
| 1.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 1.1.1 肺癌细胞株 | 第52页 |
| 1.1.2 质粒 | 第52页 |
| 1.1.3 主要实验仪器 | 第52页 |
| 1.1.4 主要实验试剂 | 第52-53页 |
| 1.1.5 主要实验试剂盒 | 第53页 |
| 1.1.6 主要实验软件 | 第53页 |
| 1.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第53页 |
| 1.2.2 microRNA芯片实验 | 第53-56页 |
| 2 结果 | 第56-60页 |
| 2.1 RNA质控结果 | 第56页 |
| 2.2 miRNA芯片扫描结果 | 第56-57页 |
| 2.3 miRNA表达谱差异分析 | 第57-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 4 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 综述 | 第71-78页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
