摘要 | 第8-11页 |
ABSTRACT | 第11-14页 |
前言 | 第15-33页 |
1 Tim-3 结构和免疫学功能 | 第15-22页 |
1.1 Tim-3 的配体 | 第16-18页 |
1.1.1 半乳糖凝集素-9 (Galectin-9/Gal-9) | 第16-17页 |
1.1.2 磷脂酰丝氨酸(PtdSer) | 第17页 |
1.1.3 癌胚抗原相关细胞粘附分子 1(CEACAM1) | 第17-18页 |
1.2 Tim-3 的免疫学功能 | 第18-22页 |
1.2.1 Tim-3 参与调节单核/巨噬细胞的活性 | 第18-19页 |
1.2.2 Tim-3 在树突状细胞上的免疫调节作用 | 第19-20页 |
1.2.3 Tim-3 在肥大细胞上的免疫调节作用 | 第20页 |
1.2.4 Tim-3 是NK细胞活化成熟的标志物 | 第20-21页 |
1.2.5 淋巴瘤来源的血管内皮细胞的Tim-3 表达升高 | 第21页 |
1.2.6 Tim-3 在其他天然免疫细胞上的功能 | 第21-22页 |
1.3 Tim-3 的信号通路 | 第22页 |
2 Tim-3 的抗感染作用研究 | 第22-24页 |
3 斑点热群立克次体的免疫学研究进展 | 第24-30页 |
3.1 斑点热群立克次体 | 第24页 |
3.2 血管内皮细胞(ECs)与斑点热 | 第24-26页 |
3.2.1 血管内皮细胞产生的细胞因子与斑点热 | 第25页 |
3.2.2 血管内皮细胞产生的粘附分子和趋化因子与斑点热 | 第25页 |
3.2.3 血管内皮细胞杀死胞内斑点热立克次体 | 第25-26页 |
3.3 天然免疫应答与斑点热 | 第26-27页 |
3.3.1 Toll样受体-4 与斑点热 | 第26页 |
3.3.2 单核巨噬细胞与斑点热 | 第26-27页 |
3.3.3 树突状细胞(DCs)与斑点热 | 第27页 |
3.3.4 NK细胞与斑点热 | 第27页 |
3.4 适应性免疫应答与斑点热 | 第27-29页 |
3.4.1 CD~(4+) T淋巴细胞与斑点热 | 第27-28页 |
3.4.2 CD~(8+) T细胞与斑点热 | 第28页 |
3.4.3 Treg细胞与斑点热 | 第28页 |
3.4.4 体液免疫与斑点热 | 第28-29页 |
3.5 免疫活化标志物、细胞因子与斑点热 | 第29-30页 |
4 斑点热立克次体感染的诊治研究 | 第30页 |
5 本课题的研究目的和意义 | 第30-33页 |
第一部分 构建稳定高/低表达Tim-3 的EA.hy 926细胞系 | 第33-43页 |
引言 | 第33页 |
1 主要试剂 | 第33-34页 |
2 主要设备 | 第34页 |
3 方法 | 第34-40页 |
3.1 细胞培养 | 第34-35页 |
3.2 G418筛选阳性细胞的刺激浓度 | 第35-36页 |
3.3 构建稳定低表达Tim-3 EA.hy 926细胞系 | 第36-38页 |
3.4 构建稳定高表达Tim-3 EA.hy 926细胞系 | 第38页 |
3.5 RT-PCR法检测组织或细胞基因m RNA水平 | 第38-39页 |
3.6 统计分析 | 第39-40页 |
4 结果 | 第40-41页 |
4.1 G418筛选阳性血管内皮细胞系EA.hy 926的浓度 | 第40页 |
4.2 稳定高/低表达Tim-3 EA.hy 926细胞系鉴定结果 | 第40-41页 |
5 讨论 | 第41-43页 |
第二部分 NO是血管内皮细胞杀伤胞内立克次体的主要因素 | 第43-55页 |
引言 | 第43-44页 |
1 材料与设备 | 第44-45页 |
1.1 试剂与耗材 | 第44-45页 |
1.2 设备 | 第45页 |
2 方法 | 第45-52页 |
2.1 细胞培养 | 第45-46页 |
2.2 常用试剂的配制 | 第46页 |
2.3 黑龙江立克次体的培养、纯化和保存 | 第46-48页 |
2.4 空斑实验 | 第48-49页 |
2.5 分离、诱导培养和鉴定HUVECs | 第49-50页 |
2.6 荧光定量PCR(qPCR)法检测立克次体含量 | 第50-51页 |
2.7 立克次体感染HUVECs | 第51页 |
2.8 Griess法检测细胞上清中NO | 第51-52页 |
2.9 统计学分析 | 第52页 |
3 结果 | 第52-53页 |
3.1 空斑实验检测立克次体的数量 | 第52页 |
3.2 血管内皮细胞释放NO杀伤胞内立克次体 | 第52-53页 |
4 讨论 | 第53-55页 |
第三部分 Tim-3 在黑龙江立克次体感染早期的免疫作用研究 | 第55-71页 |
引言 | 第55页 |
1 材料与试剂 | 第55-56页 |
1.1 实验动物、菌株和细胞 | 第55页 |
1.2 试剂 | 第55-56页 |
1.3 实验设备 | 第56页 |
2 方法 | 第56-58页 |
2.1 mTim3Ig/Ig的制备和表达 | 第56页 |
2.2 感染小鼠与药物干预 | 第56-57页 |
2.3 hTim3Ig/Ig处理立克次体感染细胞 | 第57页 |
2.4 细胞因子的检测 | 第57页 |
2.5 吞噬实验(用以检测内皮细胞被立克次体入侵的情况) | 第57-58页 |
2.6 RT-PCR、qPCR等实验方法参见本文第一、二部分。 | 第58页 |
2.7 统计分析 | 第58页 |
3 结果 | 第58-66页 |
3.1 立克次体感染与Tim-3 的表达变化 | 第58-59页 |
3.2 Tim-3 信号通路影响小鼠清除立克次体能力 | 第59-61页 |
3.3 高表达Tim-3 的转基因小鼠抵抗立克次体感染 | 第61-62页 |
3.4 Tim-3 影响细胞杀伤立克次体的能力 | 第62页 |
3.5 高/低表达Tim-3 细胞系杀伤胞内立克次体的能力不同 | 第62-63页 |
3.6 Tim-3 影响血管内皮细胞的iNOS表达 | 第63-65页 |
3.7 hTim-3Ig不能影响黑龙江立克次体入侵内皮细胞 | 第65-66页 |
3.8 Tim-3 可能通过调控Ⅰ型干扰素的表达发挥抗感染功能 | 第66页 |
4 讨论 | 第66-71页 |
结论 | 第71-72页 |
参考文献 | 第72-81页 |
附录 | 第81-85页 |
缩略词表 | 第81-84页 |
引物序列 | 第84-85页 |
个人简历 | 第85-89页 |
致谢 | 第89-90页 |