| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-17页 |
| 1.1 溶藻弧菌及其疾病 | 第9页 |
| 1.2 溶藻弧菌致病因子 | 第9-11页 |
| 1.3 Ⅲ型分泌系统 | 第11-12页 |
| 1.4 弧菌的效应蛋白功能 | 第12-14页 |
| 1.5 疫苗 | 第14-16页 |
| 1.6 本研究的目的意义和技术路线 | 第16-17页 |
| 2 溶藻弧菌HY9901 hop Pma J基因的克隆及其生物信息学 | 第17-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 本实验所采用质粒和菌株 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 生物信息学软件 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-20页 |
| 2.2.1 溶藻弧菌HY9901 hop Pma J、va1686和type3hy322基因的克隆 | 第18-20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-29页 |
| 2.3.1 hop Pma J基因的全长克隆 | 第20-21页 |
| 2.3.2 溶藻弧菌HY9901 hop Pma J基因的序列 | 第21页 |
| 2.3.3 溶藻弧菌HY9901效应蛋白Hop Pma J的理化性质 | 第21-22页 |
| 2.3.4 同源性及进化分析 | 第22-23页 |
| 2.3.5 功能结构域的预测 | 第23-26页 |
| 2.3.6 溶藻弧菌基因va1686和type3hy322的克隆 | 第26页 |
| 2.3.7 type3hy322和va1686测序结果和生物信息学分析 | 第26-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-32页 |
| 3 V.alginolyticus T3SS效应蛋白的原核表达 | 第32-40页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-33页 |
| 3.1.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.2 原核表达载体的构建 | 第32页 |
| 3.1.3 大肠杆菌诱导表达和表达条件的优化 | 第32-33页 |
| 3.2 结果与分析 | 第33-38页 |
| 3.2.1 type3hy322和va1686基因的原核表达载体构建 | 第33-34页 |
| 3.2.2 type3hy322和va1686蛋白表达和诱导 | 第34-35页 |
| 3.2.3 重组表达载体表达条件优化 | 第35-38页 |
| 3.3 讨论 | 第38-40页 |
| 4 溶藻弧菌HY9901hop Pma J基因缺失株的构建及生物学表型 | 第40-50页 |
| 4.1 实验方法 | 第40-44页 |
| 4.1.1 PCR扩增hop Pma J的基因上游序列和下游序列 | 第40-41页 |
| 4.1.2 hop Pma J缺失片段的融合 | 第41页 |
| 4.1.3 自杀载体构建 | 第41页 |
| 4.1.4 连接和转化 | 第41-42页 |
| 4.1.5 突变株构建 | 第42页 |
| 4.1.6 第二次同源重组和缺失株筛选 | 第42页 |
| 4.1.7 验证 | 第42页 |
| 4.1.8 突变株HY9901 Hop Pma J的遗传稳定性检测 | 第42页 |
| 4.1.9 HY9901 Hop Pma J的生长速率比较 | 第42-43页 |
| 4.1.10 Δhop Pma J胞外蛋白酶活性检测 | 第43页 |
| 4.1.11 Δhop Pma J细菌泳动实验 | 第43页 |
| 4.1.12 HY9901 Hop Pma J生物被膜形成能力检测 | 第43-44页 |
| 4.1.13 Δhop Pma J半数致死率(LD_(50))检测 | 第44页 |
| 4.1.14 统计学处理 | 第44页 |
| 4.2 结果与分析 | 第44-48页 |
| 4.2.1 hop Pma J基因的克隆 | 第44页 |
| 4.2.2 缺失株的构建 | 第44-45页 |
| 4.2.3 缺失株的生物学表型特征 | 第45-48页 |
| 4.3 讨论 | 第48-50页 |
| 5 突变株作为疫苗在鱼体中的存活能力检测及其免疫保护效果 | 第50-56页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第50-51页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第50页 |
| 5.1.2 Δhop Pma J在鱼体中的存活能力 | 第50-51页 |
| 5.1.3 菌液制备和接种 | 第51页 |
| 5.1.4 免疫保护率的测定 | 第51页 |
| 5.1.5 统计学处理 | 第51页 |
| 5.2 结果与分析 | 第51-53页 |
| 5.2.1 △hop Pma J在鱼体中的存活能力检测 | 第51-52页 |
| 5.2.2 免疫保护性 | 第52-53页 |
| 5.3 讨论 | 第53-56页 |
| 6 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 导师简介 | 第67页 |
