| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1 骨骼肌肌纤维类型分类及其与肉质性状的关系 | 第14-17页 |
| 1.1 骨骼肌肌纤维类型分类 | 第14-15页 |
| 1.2 不同肌纤维类型的特征 | 第15-16页 |
| 1.3 骨骼肌肌纤维类型与肉质性状的关系 | 第16-17页 |
| 2 不同肌纤维类型形成的分子调控机制研究进展 | 第17-23页 |
| 2.1 肌源调节因子（MRFs）途径 | 第17-18页 |
| 2.2 胰岛素样生长因子（IGFs）信号通路 | 第18-19页 |
| 2.3 过氧化物酶体增生物激活受体辅激活蛋白 1（peroxisome proliferator-activatedreceptor-gamma coactivator， PGC-1α）信号通路 | 第19页 |
| 2.4 钙调磷酸酶-活性T细胞核因子（Ca N-NFAT）信号通路 | 第19-21页 |
| 2.5 Sox6信号通路 | 第21-22页 |
| 2.6 TEAD-1 信号通路 | 第22页 |
| 2.7 Micro RNAs对不同肌纤维类型形成的调控机制 | 第22-23页 |
| 3 FHL3家族的研究进展 | 第23-29页 |
| 3.1 LIM蛋白分类性质及生物学功能 | 第23-25页 |
| 3.1.1 LIM-HD | 第23-24页 |
| 3.1.2 LIMK | 第24页 |
| 3.1.3 LIM-only | 第24-25页 |
| 3.1.4 其他LIM蛋白 | 第25页 |
| 3.2 FHL家族成员及特点 | 第25-27页 |
| 3.3 FHL3的功能及其调控机制 | 第27-29页 |
| 3.3.1 在肿瘤和癌症发生中的功能 | 第27页 |
| 3.3.2 在细胞骨架形成中的功能 | 第27-28页 |
| 3.3.3 在肌细胞生成中的功能 | 第28页 |
| 3.3.4 其他转录调节功能 | 第28页 |
| 3.3.5 FHL3基因变异与猪生产性状的相关性 | 第28-29页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 材料和方法 | 第30-55页 |
| 1 实验材料 | 第30-36页 |
| 1.1 实验样品 | 第30页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第30-31页 |
| 1.3 主要试剂与试剂盒 | 第31-32页 |
| 1.4 常用试剂及配制 | 第32-34页 |
| 1.5 应用的生物信息学网站及分析软件 | 第34页 |
| 1.6 所用载体 | 第34-36页 |
| 2 试验方法 | 第36-55页 |
| 2.1 细胞培养 | 第36-38页 |
| 2.1.1 细胞的复苏 | 第36-37页 |
| 2.1.2 C2C12细胞的增殖培养 | 第37页 |
| 2.1.3 C2C12细胞的分化培养 | 第37页 |
| 2.1.4 细胞的冻存 | 第37-38页 |
| 2.2 FHL3超表达载体构建 | 第38-43页 |
| 2.2.1 C2C12细胞总RNA的提取和c DNA的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.2 小鼠FHL3 c DNA的克隆 | 第39-40页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳和成像 | 第40页 |
| 2.2.4 PCR产物的胶回收和克隆测序 | 第40-42页 |
| 2.2.5 质粒提取 | 第42页 |
| 2.2.6 pc DNA3.1-FHL3真核表达载体的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3 FHL3-si RNA干涉片段的选取 | 第43页 |
| 2.4 脂质体介导的细胞转染（6 孔板） | 第43-44页 |
| 2.5 Quantitative real-time PCR分析 | 第44-45页 |
| 2.6 Western blotting分析 | 第45-47页 |
| 2.6.1 蛋白提取 | 第45页 |
| 2.6.2 BCA蛋白浓度测定 | 第45页 |
| 2.6.3 SDS-PAGE电泳 | 第45-46页 |
| 2.6.4 转膜 | 第46页 |
| 2.6.5 封闭 | 第46页 |
| 2.6.6 免疫反应 | 第46-47页 |
| 2.6.7 ECL化学发光检测 | 第47页 |
| 2.7 免疫荧光 | 第47-48页 |
| 2.8 C2C12细胞DNA提取 | 第48页 |
| 2.9 My HC 2a基因 5’端上游调控区域缺失载体 | 第48-51页 |
| 2.9.1 My HC 2a启动子片段的克隆 | 第48-49页 |
| 2.9.2 缺失引物的设计 | 第49-50页 |
| 2.9.3 缺失片段的扩增、克隆、质粒提取、双酶切 | 第50-51页 |
| 2.9.4 My HC 2a启动子缺失载体的鉴定 | 第51页 |
| 2.10 细胞的转染 (24 孔板) | 第51页 |
| 2.11 双荧光素酶活性的检测 | 第51页 |
| 2.12 转录因子结合位点突变载体构建 | 第51-53页 |
| 2.13 质粒共转染 | 第53页 |
| 2.14 核蛋白提取 | 第53页 |
| 2.15 EMSA | 第53页 |
| 2.16 Ch IP | 第53页 |
| 2.17 CREB超表达载体的构建 | 第53-55页 |
| 第三章 研究结果与分析 | 第55-77页 |
| 1 超表达FHL3对My HC各亚型基因表达的影响 | 第55-60页 |
| 1.1 FHL3超表达载体的鉴定 | 第55页 |
| 1.2 超表达FHL3后My HC各亚型基因表达量的变化 | 第55-60页 |
| 2 干涉FHL3对My HC各亚型基因表达量的影响 | 第60-64页 |
| 3 FHL3基因调控My HC 1/slow基因表达的分子机制 | 第64-65页 |
| 4 FHL3基因调控My HC 2a基因表达分子机制 | 第65-77页 |
| 4.1 共表达FHL3和Myo D基因对My HC 2a基因表达的影响 | 第65-66页 |
| 4.2 My HC 2a基因 5′端上游调控区域缺失载体的构建 | 第66-67页 |
| 4.3 My HC 2a基因 5′ 端上游调控区域缺失片段的转录活性分析 | 第67页 |
| 4.4 CREB基因对My HC 2a基因表达的影响 | 第67-69页 |
| 4.5 FHL3基因通过CREB调控My HC 2a基因表达 | 第69-70页 |
| 4.6 FHL3通过CREB磷酸化水平调控My HC 2a基因表达 | 第70-72页 |
| 4.7 FHL3蛋白与CREB蛋白相互作用验证 | 第72-73页 |
| 4.8 体外和体内实验验证CREB和My HC 2a启动子序列的结合 | 第73-76页 |
| 4.9 FHL3 对 CREB 与 My HC 2a 启动子片段结合能力的影响 | 第76-77页 |
| 第四章 讨论 | 第77-83页 |
| 1 FHL3基因 在C2C12成肌细胞分化过程中的表达模式及其对My HC基因表达的影响 | 第77页 |
| 2 FHL3调控My HC 1/slow基因表达的信号通路 | 第77-78页 |
| 3 FHL3调控My HC 2a因表达的信号通路 | 第78-81页 |
| 3.1 FHL3基因通过CREB蛋白正向调控My HC 2a基因表达 | 第78-80页 |
| 3.2 FHL3可以同时与Myo D和p CREB结合，但与p CREB结合能力更强 | 第80-81页 |
| 4 FHL3基因差异调控My HC基因表达的分子机制模型 | 第81-83页 |
| 第五章 总结 | 第83-85页 |
| 1 主要研究结果 | 第83页 |
| 2 主要创新点 | 第83-84页 |
| 3 不足之处 | 第84页 |
| 4 下一步工作计划 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-100页 |
| 在读期间发表论文列表 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
