| 中文摘要 | 第7-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-27页 |
| 1.1 α-酮戊二酸脱氢酶系(KGDC)概况 | 第14-16页 |
| 1.1.1 α-酮戊二酸脱氢酶系(KGDC)的组成 | 第14-15页 |
| 1.1.2 α-酮戊二酸脱氢酶系(KGDC)的结构 | 第15页 |
| 1.1.3 α-酮戊二酸脱氢酶系的反应机制 | 第15-16页 |
| 1.1.4 α-酮戊二酸脱氢酶系的调节 | 第16页 |
| 1.2 三羧酸循环 | 第16-21页 |
| 1.2.1 三羧酸循环的定义 | 第17页 |
| 1.2.2 三羧酸循环的步骤 | 第17-20页 |
| 1.2.3 三羧酸循环途径的生物学意义 | 第20页 |
| 1.2.4 三羧酸循环的代谢调节 | 第20-21页 |
| 1.3 硫杆菌的代谢研究 | 第21-23页 |
| 1.3.1 有机物质对专性自养硫杆菌生长的影响 | 第21-23页 |
| 1.3.1.1 有机物质对硫杆菌的抑制作用 | 第21-22页 |
| 1.3.1.2 有机物质对硫杆菌的促进作用 | 第22-23页 |
| 1.4 硫杆菌中的三羧酸循环 | 第23-26页 |
| 1.5 本课研究意义及研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 大肠杆菌α-酮戊二酸脱氢酶基因的克隆、载体构建 | 第27-52页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料与方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第27-28页 |
| 2.2.2 培养基和培养条件 | 第28页 |
| 2.2.3 抗生素使用浓度 | 第28-29页 |
| 2.2.4 菌种保藏 | 第29页 |
| 2.2.5 E.coli K-12染色体DNA的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.6 质粒DNA的制备 | 第30-32页 |
| 2.2.6.1 质粒DNA的大量提取 | 第30-31页 |
| 2.2.6.2 质粒的快速提取(Birnborn,1979) | 第31-32页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.2.8 DNA浓度、纯度和DNA分子量的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.9 限制性核酸内切酶酶切 | 第33-34页 |
| 2.2.10 连接 | 第34页 |
| 2.2.11 质粒DNA的转化 | 第34-35页 |
| 2.2.12 琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第35页 |
| 2.2.13 PCR技术 | 第35-36页 |
| 2.2.14 重组质粒转化大肠杆菌JM109、重组子的筛选 | 第36页 |
| 2.2.15 测序 | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-52页 |
| 2.3.1 α-酮戊二酸脱氢酶基因的克隆 | 第36-40页 |
| 2.3.1.1 α-酮戊二酸脱氢酶基因(sucAB和lpdA)的获得 | 第36-38页 |
| 2.3.1.2 α-酮戊二酸脱氢酶基因表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.2 携带sucAB和lpdA基因的重组质粒的筛选及鉴定 | 第40-43页 |
| 2.3.2.1 筛选 | 第40-41页 |
| 2.3.2.2 鉴定——携带sucAB和lpdA基因的重组质粒的限制性内切酶酶切分析 | 第41-43页 |
| 2.3.3 克隆基因的序列测定 | 第43-48页 |
| 2.3.4 pUC18-sucAB-lpdA重组质粒的构建 | 第48-52页 |
| 2.3.4.1 筛选 | 第49页 |
| 2.3.4.2 鉴定 | 第49-52页 |
| 第三章 α-酮戊二酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达研究 | 第52-63页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 材料和方法 | 第52-58页 |
| 3.2.1 材料 | 第52-53页 |
| 3.2.1.1 菌株和质粒 | 第52-53页 |
| 3.2.1.2 培养基 | 第53页 |
| 3.2.1.2.1 LB培养基 | 第53页 |
| 3.2.1.2.2 麦康凯琼脂培养基 | 第53页 |
| 3.2.1.3 细胞提取液的制备 | 第53页 |
| 3.2.2 方法 | 第53-58页 |
| 3.2.2.1 α-酮戊二酸脱氢酶活性测定 | 第53-55页 |
| 3.2.2.1.1 酶活性测定原理 | 第53-54页 |
| 3.2.2.1.2 酶活性测定所需试剂 | 第54页 |
| 3.2.2.1.3 酶活性测定方法 | 第54-55页 |
| 3.2.2.1.4 酶活力单位的计算 | 第55页 |
| 3.2.2.2 携带重组质粒的缺陷型菌株的筛选 | 第55-56页 |
| 3.2.2.3 鉴定—提取重组质粒电泳验证 | 第56页 |
| 3.2.2.4 蛋白质含量的测定 | 第56-57页 |
| 3.2.2.5 表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第57-58页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第58-63页 |
| 3.3.1 重组质粒转化大肠杆菌缺陷株JRG301 | 第58-59页 |
| 3.3.2 重组质粒转化大肠杆菌缺陷株JRG465 | 第59页 |
| 3.3.3 携带α-酮戊二酸脱氢酶基因的重组质粒在大肠杆菌α-酮戊二酸脱氢酶基因缺陷型菌株中的表达 | 第59-61页 |
| 3.3.4 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第61-63页 |
| 总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第69页 |
