| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 1.1 重组大肠杆菌高密度发酵中外源蛋白质的表达 | 第14-26页 |
| 1.1.1 重组大肠杆菌外源蛋白质表达概述 | 第14页 |
| 1.1.2 高密度培养技术 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 限制大肠杆菌高密度生长的主要因素 | 第15页 |
| 1.1.2.2 高密度培养的途径 | 第15-16页 |
| 1.1.3 分批补料培养 | 第16-17页 |
| 1.1.4 大肠杆菌高密度培养所使用的培养基 | 第17-19页 |
| 1.1.4.1 摇瓶和种子培养基 | 第17页 |
| 1.1.4.2 发酵培养基 | 第17-18页 |
| 1.1.4.3 碳源 | 第18页 |
| 1.1.4.4 氮源与无机盐 | 第18-19页 |
| 1.1.5 抑制性副产物 | 第19-21页 |
| 1.1.5.1 乙酸的产生及抑制作用机理 | 第19-20页 |
| 1.1.5.2 影响乙酸积累的因素 | 第20页 |
| 1.1.5.3 降低乙酸积累的方法 | 第20-21页 |
| 1.1.6 培养条件 | 第21-22页 |
| 1.1.6.1 pH | 第21页 |
| 1.1.6.2 温度 | 第21-22页 |
| 1.1.6.3 溶解氧 | 第22页 |
| 1.1.7 外源蛋白质的表达 | 第22-24页 |
| 1.1.7.2 启动子 | 第22页 |
| 1.1.7.3 诱导剂 | 第22-23页 |
| 1.1.7.4 诱导条件 | 第23页 |
| 1.1.7.5 宿主菌对外源蛋白质表达的影响 | 第23-24页 |
| 1.1.8 质粒稳定性 | 第24-26页 |
| 1.1.8.1 重组质粒稳定性的影响因素 | 第24-25页 |
| 1.1.8.2 对于质粒不稳定性的对策 | 第25-26页 |
| 1.2 重组巴斯德毕赤酵母高密度培养中外源蛋白质的表达 | 第26-38页 |
| 1.2.1 巴斯德毕赤酵母简介 | 第26-27页 |
| 1.2.2 斯德毕赤酵母高效表达外源基因的机理与特点 | 第27-28页 |
| 1.2.3 斯德毕赤酵母在外源蛋白生产中的优势 | 第28-29页 |
| 1.2.4 巴斯德毕赤酵母在外源蛋白生产中的广泛应用 | 第29-30页 |
| 1.2.5. 巴斯德毕赤酵母表达系统表达外源蛋白的一般步骤 | 第30页 |
| 1.2.6 重组巴斯德毕赤酵母的构建 | 第30-32页 |
| 1.2.6.1 宿主菌 | 第31页 |
| 1.2.6.2 表达质粒 | 第31-32页 |
| 1.2.6.3 启动子 | 第32页 |
| 1.2.6.4 整合位点 | 第32页 |
| 1.2.7 重组巴斯德毕赤酵母的培养条件 | 第32-38页 |
| 1.2.7.1 概述 | 第32-33页 |
| 1.2.7.2 培养温度 | 第33页 |
| 1.2.7.3 重组巴斯德毕赤酵母高密度发酵策略 | 第33页 |
| 1.2.7.4 影响重组巴斯德毕赤酵母高密度发酵的因素 | 第33-34页 |
| 1.2.7.5 不同表型的构建重组毕赤酵母的发酵方法 | 第34-36页 |
| 1.2.7.6 补料培养基成分的影响 | 第36页 |
| 1.2.7.7 防止外源蛋白的降解 | 第36-38页 |
| 第二章 重组大肠杆菌高密度发酵中外源蛋白质的表达 | 第38-70页 |
| 2.1 引言 | 第38-39页 |
| 2.1.1 乳糖代替IPTG诱导外源蛋白质在大肠杆菌中的表达 | 第38页 |
| 2.1.2 人B淋巴细胞刺激因子简介 | 第38页 |
| 2.1.3 甘油脱水酶(glycerol dehydratase,dhaB)简介 | 第38-39页 |
| 2.2 材料与方法 | 第39-46页 |
| 2.2.1 材料 | 第39-41页 |
| 2.2.1.1 菌株 | 第39页 |
| 2.2.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 2.2.1.3 主要设备 | 第40-41页 |
| 2.2.2 培养基 | 第41-42页 |
| 2.2.2.1 摇瓶培养基 | 第41页 |
| 2.2.2.2 发酵罐培起始养基 | 第41页 |
| 2.2.2.3 补料液 | 第41页 |
| 2.2.2.4 诱导液 | 第41-42页 |
| 2.2.3 培养方法 | 第42-43页 |
| 2.2.3.1 培养基的准备与灭菌 | 第42页 |
| 2.2.3.2 菌株保藏方法 | 第42页 |
| 2.2.3.3 摇瓶实验 | 第42页 |
| 2.2.3.4 发酵罐培养 | 第42-43页 |
| 2.2.4 分析方法 | 第43-46页 |
| 2.2.4.1 菌体生长情况监测 | 第43页 |
| 2.2.4.2 甘油的测定 | 第43页 |
| 2.2.4.3 葡萄糖的测定 | 第43页 |
| 2.2.4.4 比生长速率 | 第43-44页 |
| 2.2.4.5 细胞全蛋白表达量 | 第44页 |
| 2.2.4.6 可溶性蛋白表达量 | 第44页 |
| 2.2.4.7 SDS-PAGE | 第44-45页 |
| 2.2.4.8 SDS-PAGE | 第45-46页 |
| 2.3 乳糖代替IPTG诱导表达hBLyS | 第46-62页 |
| 2.3.1 IPTG与乳糖诱导效果的比较 | 第46-49页 |
| 2.3.2 乳糖浓度对诱导结果的影响 | 第49-51页 |
| 2.3.3 批式发酵培养(Batch Culture) | 第51-52页 |
| 2.3.4 分批补料发酵培养(Fed-Batch Culture) | 第52-62页 |
| 2.3.4.1 以葡萄糖为限制性底物的分批补料发酵培养 | 第52-55页 |
| 2.3.4.2 以甘油为限制性底物的分批补料发酵培养 | 第55-57页 |
| 2.3.4.3 乳糖直接诱导 | 第57-59页 |
| 2.3.4.4 乳糖混合甘油直接诱导 | 第59-61页 |
| 2.3.4.5 总结 | 第61-62页 |
| 2.4 重组融合蛋白GST-dha B1可溶性表达的研究 | 第62-67页 |
| 2.4.1 不同诱导温度,与IPTG浓度对于蛋白表达可溶性的影响 | 第62-63页 |
| 2.4.2 不同诱导温度,与乳糖浓度对于蛋白表达可溶性的影响 | 第63-65页 |
| 2.4.3 乳糖诱导下融合蛋白表达动力学与细胞生长动力学 | 第65-67页 |
| 2.5 本章总结 | 第67页 |
| 2.6 存在的问题 | 第67-70页 |
| 第三章 重组毕赤酵母高密度培养中外源蛋白质的表达 | 第70-100页 |
| 3.1 引言 | 第70页 |
| 3.2 材料与方法 | 第70-78页 |
| 3.2.1 材料 | 第70-72页 |
| 3.2.1.1 菌株与质粒 | 第70-71页 |
| 3.2.1.2 主要试剂 | 第71-72页 |
| 3.2.1.3 主要设备 | 第72页 |
| 3.2.2 培养基 | 第72-73页 |
| 3.2.2.1 摇瓶与筛选培养基 | 第72-73页 |
| 3.2.2.2 发酵罐中起始培养基 | 第73页 |
| 3.2.3 菌株筛选方法 | 第73-75页 |
| 3.2.3.1 筛选His+阳性克隆 | 第73-74页 |
| 3.2.3.2 G418筛选高拷贝转化子 | 第74页 |
| 3.2.3.3 表型筛选 | 第74-75页 |
| 3.2.3.4 MM—罗丹明平板筛选 | 第75页 |
| 3.2.3.5 摇瓶筛选 | 第75页 |
| 3.2.4 培养方法 | 第75-76页 |
| 3.2.4.1 菌株保藏方法 | 第75-76页 |
| 3.2.4.2 摇瓶发酵方法 | 第76页 |
| 3.2.4.3 高密度发酵方法 | 第76页 |
| 3.2.5 分析方法 | 第76-78页 |
| 3.2.5.1 菌体生长情况监测 | 第76页 |
| 3.2.5.2 甘油的测定 | 第76页 |
| 3.2.5.3 葡萄糖的测定 | 第76-77页 |
| 3.2.5.4 甲醇在线检测 | 第77页 |
| 3.2.5.5 脂肪酶分析法 | 第77-78页 |
| 3.2.5.6 比生长速率 | 第78页 |
| 3.2.5.7 发酵上清液中重组根霉脂肪酶表达量 | 第78页 |
| 3.3 重组毕赤酵母中根霉脂肪酶(RAL)的表达 | 第78-97页 |
| 3.3.1 菌株筛选 | 第78-83页 |
| 3.3.1.1 筛选His+阳性克隆 | 第78-79页 |
| 3.3.1.2 G418筛选高拷贝转化子 | 第79页 |
| 3.3.1.3 表型鉴定 | 第79-80页 |
| 3.3.1.4 MM-罗丹明平板筛选 | 第80-81页 |
| 3.3.1.5 摇瓶筛选 | 第81-83页 |
| 3.3.2 毕赤酵母高密度发酵中根酶脂肪酶的表达 | 第83-97页 |
| 3.3.2.1 通过溶氧来控制甲醇的流加 | 第84-85页 |
| 3.3.2.2 通过甲醇在线检测仪来控制甲醇的流加 | 第85-87页 |
| 3.3.2.3 经过提高生物量之后,通过甲醇在线检测仪来控制甲醇的流加 | 第87-90页 |
| 3.3.2.4 重组菌毕赤酵母在BSM培养基中的表达根霉脂肪酶前肽基因 | 第90-92页 |
| 3.3.2.5 高溶氧水平对于重组毕赤酵母表达前肽脂肪酶基因的影响 | 第92-94页 |
| 3.3.2.6 酸水解干酪素对重组毕赤酵母表达根霉脂肪酶前肽基因的影响 | 第94-97页 |
| 3.4 本章总结 | 第97-98页 |
| 3.5 存在的问题 | 第98-100页 |
| 第四章 结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 符号说明 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第114页 |
