| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 植物倍半萜合酶研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 萜类化合物简介 | 第12页 |
| 1.1.2 植物倍半萜合酶简介 | 第12-13页 |
| 1.1.3 倍半萜合酶的催化机理 | 第13-14页 |
| 1.1.4 植物倍半萜合酶研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2 青蒿紫穗槐二烯合酶研究进展 | 第16-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-22页 |
| 2.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 方法 | 第19-22页 |
| 2.2.1 快速定点突变 | 第19页 |
| 2.2.2 感受态细胞的转化 | 第19-20页 |
| 2.2.3 质粒的提取 | 第20页 |
| 2.2.4 蛋白质的纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.5 蛋白质的体外催化反应 | 第21-22页 |
| 第3章 紫穗槐二烯合酶 C-末端截短对其功能的影响 | 第22-29页 |
| 3.1 菌株、载体和试剂 | 第22页 |
| 3.2 方法 | 第22-24页 |
| 3.2.1 ADS 基因的突变 | 第22页 |
| 3.2.2 突变质粒的大肠杆菌表达及纯化 | 第22-23页 |
| 3.2.3 突变蛋白催化产物分析 | 第23-24页 |
| 3.2.4 截短蛋白催化活性的初步分析 | 第24页 |
| 3.3 结果 | 第24-27页 |
| 3.3.1 ADS 基因的突变 | 第24-25页 |
| 3.3.2 突变质粒的大肠杆菌表达及纯化 | 第25页 |
| 3.3.3 突变蛋白催化产物分析 | 第25页 |
| 3.3.4 催化活性的初步分析 | 第25-27页 |
| 3.3.5 K239V 突变体催化产物分析 | 第27页 |
| 3.4 讨论 | 第27-29页 |
| 第4章 紫穗槐二烯合酶 G 螺旋纽结突变对产物特异性的影响 | 第29-37页 |
| 4.1 菌株、载体和试剂 | 第29页 |
| 4.2 方法 | 第29-31页 |
| 4.2.1 ADS 基因的突变 | 第29页 |
| 4.2.2 突变质粒大肠杆菌表达及纯化 | 第29-30页 |
| 4.2.3 突变体催化产物分析 | 第30-31页 |
| 4.3 结果 | 第31-34页 |
| 4.3.1 ADS 基因点突变 | 第31页 |
| 4.3.2 突变质粒大肠杆菌表达及纯化 | 第31页 |
| 4.3.3 G401A 突变体催化产物分析 | 第31-33页 |
| 4.3.4 G400A 单突变和 G400A+G401A 双突变催化产物分析 | 第33页 |
| 4.3.5 L405A 突变催化产物分析 | 第33-34页 |
| 4.3.6 A402G、A402Y 突变催化产物分析 | 第34页 |
| 4.4 讨论 | 第34-37页 |
| 4.4.1 G401 在 ADS 催化作用中的功能 | 第34-35页 |
| 4.4.2 G400 在 ADS 催化作用中的功能 | 第35页 |
| 4.4.3 L405 在 ADS 催化作用中的功能 | 第35-37页 |
| 第5章 紫穗槐二烯合酶 RXR 基序突变对产物特异性的影响 | 第37-45页 |
| 5.1 菌株、载体和试剂 | 第37页 |
| 5.2 方法 | 第37-39页 |
| 5.2.1 ADS 基因点突变 | 第37-38页 |
| 5.2.2 突变质粒大肠杆菌表达及纯化 | 第38页 |
| 5.2.3 突变体催化产物分析 | 第38页 |
| 5.2.4 R262K 突变体催化产物 Nerolidol 手性分析 | 第38-39页 |
| 5.3 结果 | 第39-42页 |
| 5.3.1 ADS 基因点突变 | 第39页 |
| 5.3.2 突变质粒大肠杆菌表达及纯化 | 第39页 |
| 5.3.3 R262K、R264K 突变体外催化产物分析 | 第39-42页 |
| 5.3.4 R262L、D300E、D300N 和 D300A 突变体外催化产物分析 | 第42页 |
| 5.4 讨论和结论 | 第42-45页 |
| 5.4.1 R262 在倍半萜合酶中的作用 | 第42-43页 |
| 5.4.2 底物 FPP 在酶活性中心中的构象及取向的确定 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 在读期间公开发表的学术论文 | 第52页 |
