| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-20页 |
| 1.1 DNA 甲基化 | 第13-15页 |
| 1.1.1 DNA 甲基化与表观遗传学 | 第13页 |
| 1.1.2 DNA 甲基化与 CpG 岛 | 第13-14页 |
| 1.1.3 DNA 甲基化与肿瘤 | 第14-15页 |
| 1.1.4 DNA 甲基化的检测方法 | 第15页 |
| 1.2 肿瘤耐药 | 第15-17页 |
| 1.2.1 肿瘤耐药的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 MDR 的耐药机制 | 第16-17页 |
| 1.3 WTH3 | 第17-20页 |
| 1.3.1 WTH3 的分子结构和细胞分布 | 第17页 |
| 1.3.2 WTH3 与 MDR 的关系 | 第17-18页 |
| 1.3.3 WTH3 的表达调控机制 | 第18-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器及设备 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第21-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.0 SKOV3,SKOV3/DDP 细胞复苏、培养、传代及冻存 | 第24页 |
| 2.2.1 SKOV3,SKOV3/DDP 细胞生长情况测定 | 第24-25页 |
| 2.2.2 SKOV3,SKOV3/DDP 细胞中 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 RT-PCR 检测 WTH3 的表达 | 第26-28页 |
| 2.2.4 SKOV3,SKOV3/DDP 细胞中 DNA 提取 | 第28-29页 |
| 2.2.5 基因组 DNA 的甲基化修饰 | 第29-30页 |
| 2.2.6 基因组 DNA 修饰后 PCR 扩增 WTH3 启动子区域 | 第30-31页 |
| 2.2.7 PCR 产物目的片段回收 | 第31-32页 |
| 2.2.8 目的 DNA 片段与 T 载体连接 | 第32-33页 |
| 2.2.9 CaCl2 法感受态细胞制备 | 第33页 |
| 2.2.10 细胞转化 | 第33-34页 |
| 2.2.11 克隆细胞鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.12 克隆细胞扩增、测序 | 第35页 |
| 2.2.13 WTH3 表达质粒载体构建 | 第35-39页 |
| 第3章 结果 | 第39-48页 |
| 3.1 SKOV3,SKOV3/DDP 细胞的培养 | 第39-41页 |
| 3.2 WTH3MRNA 在 SKOV3,SKOV3/DDP 细胞中的表达及启动子区的甲基化 | 第41-44页 |
| 3.2.1 WTH3 在 SKOV3,SKOV3/DDP 细胞中的表达 | 第41页 |
| 3.2.2 基因组 DNA 修饰后 PCR 扩增 WTH3 启动子区域 | 第41-42页 |
| 3.2.3 PCR 鉴定连接情况 | 第42页 |
| 3.2.4 WTH3 启动子区 | 第42页 |
| 3.2.5 甲基化位点测序结果 | 第42-44页 |
| 3.3 重组质粒 PIRES2–EGFP-WTH3 的构建和表达 | 第44-48页 |
| 3.3.1 WTH3 目的基因片段 | 第44页 |
| 3.3.2 重组质粒双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 测序 | 第45页 |
| 3.3.4 转染后 EGFP 表达的检测 | 第45-46页 |
| 3.3.5 RT-PCR 检测转染后 SKOV3/DDP 细胞中 WTH3mRNA 的表达 | 第46页 |
| 3.3.6 转染后细胞对肿瘤药物的敏感性 | 第46-48页 |
| 第4章 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 WTH3MRNA 在 SKOV3、SKOV3/DDP 中的表达 | 第48-49页 |
| 4.2 WTH3 启动子区域甲基化水平的检测 | 第49-50页 |
| 4.3 重组质粒 pIRES2–EGFP-WTH3 的构建和表达对 SKOV3/DDP耐药性影响的检测 | 第50-51页 |
| 第5章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 作者简介 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
