| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| ·海藻糖在自然界的分布 | 第13页 |
| ·海藻糖的结构、性质、功能和应用前景 | 第13-14页 |
| ·海藻糖的生产制备 | 第14-16页 |
| ·海藻糖的市场前景 | 第16页 |
| ·TreY-TreZ 途径合成海藻糖的研究进展 | 第16-19页 |
| ·TreY-TreZ 途径的存在 | 第16-17页 |
| ·国内外有关TreY-TreZ 途径合成海藻糖的研究报道 | 第17-18页 |
| ·麦芽寡糖基海藻糖合成酶与麦芽寡糖基海藻糖水解酶的催化机理 | 第18-19页 |
| ·微生物表达系统 | 第19-22页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19-20页 |
| ·芽孢杆菌表达系统 | 第20页 |
| ·其它细菌表达系统 | 第20-21页 |
| ·酵母表达系统 | 第21-22页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| ·本研究的目的 | 第22页 |
| ·本研究的意义 | 第22-24页 |
| 第二章 谷氨酸棒杆菌麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆 | 第24-34页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·工具酶和试剂 | 第24页 |
| ·引物合成 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·常用溶液的配制 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·谷氨酸棒杆菌（ATCC13032）基因组 DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·验证所提基因组 DNA 的来源是否正确 | 第26页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第26-27页 |
| ·目的片段的回收 | 第27页 |
| ·目的片段与 T 载体的连接 | 第27-28页 |
| ·E.coli TOP10 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·转化 E.coli TOP10 | 第28页 |
| ·重组单克隆的 PCR 验证 | 第28-29页 |
| ·SDS 碱裂解法小量制备质粒DNA | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-30页 |
| ·CgMTHase 编码基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·菌落 PCR 筛选阳性单克隆 | 第30页 |
| ·测序结果及分析 | 第30页 |
| ·本章小结与讨论 | 第30-34页 |
| 第三章 CgMTHase 在大肠杆菌中的表达与活性鉴定 | 第34-51页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌株及载体 | 第34页 |
| ·工具酶和试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·培养基及试剂的配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·pMD-18T-treZ 的酶切与目的片段的回收 | 第35页 |
| ·表达质粒pRSET-B 的酶切 | 第35-36页 |
| ·双酶切后的treZ 与pRSET-B 的连接 | 第36页 |
| ·转化 E.coli TOP10 | 第36页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达菌株的构建 | 第36页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·SDS-GAGE 步骤 | 第37页 |
| ·蛋白定量 | 第37-38页 |
| ·重组表达的 MTHase 粗酶液酶活的检测 | 第38页 |
| ·重组表达的CgMTHase 的纯化 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-49页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·重组菌的诱导表达及表达产物分析 | 第40-41页 |
| ·重组表达的CgMTHase 酶活的鉴定 | 第41-46页 |
| ·CgMTHase 表达条件的优化 | 第46-47页 |
| ·目的蛋白的定量 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·本章小结与讨论 | 第49-51页 |
| ·CgMTHase 的表达结果 | 第49页 |
| ·CgMTHase 形成包涵体的分析 | 第49页 |
| ·CgMTHase 的活性分析 | 第49-50页 |
| ·用大肠杆菌表达系统表达 CgMTHase 的优缺点 | 第50-51页 |
| 第四章 CgMTHase 在毕赤酵母和枯草芽孢杆菌中分泌表达的尝试 | 第51-64页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·菌株及载体 | 第51页 |
| ·工具酶和试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器 | 第51页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| ·引物设计 | 第52-53页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·重组表达载体的检测 | 第54页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第54-55页 |
| ·毕赤酵母重组单克隆的筛选 | 第55页 |
| ·含treZ 重组毕赤酵母的诱导表达 | 第55页 |
| ·枯草芽孢杆菌的转化 | 第55-56页 |
| ·枯草芽孢杆菌重组单克隆的筛选 | 第56页 |
| ·含treZ 重组枯草芽孢杆菌的诱导表达 | 第56页 |
| ·酶活检测 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-60页 |
| ·毕赤酵母表达载体pPIC9K-treZ 的构建 | 第56-57页 |
| ·毕赤酵母 GS115 的转化和重组转化子的筛选 | 第57-59页 |
| ·重组毕赤酵母阳性单克隆诱导培养基上清液酶活检测结果 | 第59-60页 |
| ·CgMTHase 在枯草芽孢杆菌中的分泌表达结果 | 第60页 |
| ·本章小结与讨论 | 第60-64页 |
| 第五章 全文结论 | 第64-66页 |
| ·主要研究结论 | 第64页 |
| ·下一步工作设想 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简历 | 第72页 |
