摘要 | 第3-5页 |
abstract | 第5-6页 |
第1章 引言 | 第10-13页 |
第2章 主要材料及试剂 | 第13-17页 |
2.1 实验材料 | 第13-14页 |
2.1.1 实验所用细胞 | 第13页 |
2.1.2 主要试剂 | 第13-14页 |
2.2 实验用仪器 | 第14-15页 |
2.3 主要试剂的配制 | 第15-17页 |
第3章 实验方法 | 第17-24页 |
3.1 细胞培养与实验分组 | 第17-19页 |
3.1.1 小鼠的前成骨细胞(MC3T3-E1)复苏 | 第17页 |
3.1.2 细胞换液 | 第17页 |
3.1.3 细胞传代 | 第17-18页 |
3.1.4 细胞冻存 | 第18页 |
3.1.5 实验分组 | 第18-19页 |
3.2 Western blot法 | 第19-20页 |
3.2.1 提取MC3T3-E1细胞内总蛋白 | 第19页 |
3.2.2 测蛋白浓度(BCA法) | 第19页 |
3.2.3 SDS-PAGE电泳 | 第19页 |
3.2.4 湿转法转膜 | 第19-20页 |
3.2.5 免疫反应 | 第20页 |
3.2.6 ECL化学发光 | 第20页 |
3.3.免疫荧光法 | 第20-21页 |
3.3.1 基本原理 | 第20页 |
3.3.2 操作步骤 | 第20-21页 |
3.4 双荧光素酶报告基因方法 | 第21-22页 |
3.4.1 基本原理 | 第21页 |
3.4.2 操作步骤 | 第21-22页 |
3.5 MTT法测定细胞的存活率 | 第22页 |
3.5.1 基本原理 | 第22页 |
3.5.2 操作步骤 | 第22页 |
3.6.茜素红染色观察MC3T3-E1细胞矿化结节 | 第22-23页 |
3.6.1 基本原理 | 第22-23页 |
3.6.2 操作步骤 | 第23页 |
3.7 数据处理及统计学方法 | 第23-24页 |
第4章 实验结果 | 第24-34页 |
4.1 高糖升高了MC3T3-E1细胞中ERα和ERβ蛋白的表达 | 第24-26页 |
4.1.1 高糖诱导下MC3T3-E1细胞中ERα和ERβ蛋白表达的量效关系15 | 第24-25页 |
4.1.2 高糖诱导下MC3T3-E1细胞中ERα和ERβ蛋白表达的时效关系16 | 第25-26页 |
4.2 高糖能够抑制雌激素促进MC3T3-E1细胞ERα和ERβ表达与核内分布的效应 | 第26-29页 |
4.2.1 高糖下调雌激素引起的ERα和ERβ蛋白表达升高效应 | 第26-28页 |
4.2.2 高糖下调雌激素诱导的ERα和ERβ入核效应 | 第28-29页 |
4.3 高糖破坏雌激素对MC3T3-E1细胞的保护作用 | 第29-30页 |
4.3.1 高糖能够抑制雌激素引起的MC3T3-E1细胞活力升高效应 | 第29页 |
4.3.2 高糖能够抑制雌激素对MC3T3-E1细胞矿化结节的促进作用 | 第29-30页 |
4.4 高糖能够抑制雌激素对MC3T3-E1细胞ERα和ERβ转录活性的激活 | 第30-31页 |
4.5 LiCl逆转高糖诱导下的MC3T3-E1细胞ERα和ERβ蛋白表达的升高 | 第31-32页 |
4.6 LiCL能够抑制高糖对MC3T3-E1细胞ERα和ERβ转录活性的下调 | 第32-34页 |
第5章 讨论 | 第34-37页 |
第6章 实验结论 | 第37-38页 |
致谢 | 第38-39页 |
参考文献 | 第39-43页 |
综述 | 第43-52页 |
参考文献 | 第50-52页 |