中文摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
缩略表 | 第9-10页 |
1 前言 | 第10-24页 |
1.1 细菌转录因子 | 第10页 |
1.2 c-di-GMP分子及其受体蛋白 | 第10-12页 |
1.3 分枝杆菌细胞壁 | 第12-20页 |
1.3.1 分枝杆菌细胞壁结构特征 | 第12-15页 |
1.3.2 AG和LAM的生物合成及意义 | 第15-19页 |
1.3.3 阿拉伯糖转移酶参与分枝杆菌细胞壁的合成 | 第19-20页 |
1.4 EMB与分枝杆菌 | 第20-22页 |
1.5 本研究的目的、意义及研究思路 | 第22-24页 |
1.5.1 本研究的目的及意义 | 第22页 |
1.5.2 本研究的研究思路 | 第22-24页 |
2 材料与方法 | 第24-39页 |
2.1 实验材料与试剂 | 第24-28页 |
2.1.1 供试菌株与质粒 | 第24-25页 |
2.1.2 培养基 | 第25页 |
2.1.3 实验所用引物 | 第25-26页 |
2.1.4 抗生素和酶 | 第26页 |
2.1.5 His-蛋白诱导和纯化等相关试剂 | 第26-27页 |
2.1.6 其他实验相关试剂 | 第27-28页 |
2.2 实验方法 | 第28-39页 |
2.2.1 基因克隆 | 第28-30页 |
2.2.2 耻垢分枝杆菌感受态的制备及电转化 | 第30-31页 |
2.2.3 蛋白质的诱导表达、纯化及透析 | 第31-32页 |
2.2.4 凝胶迁移实验 | 第32-33页 |
2.2.5 紫外交联实验 | 第33-34页 |
2.2.6 等温滴定量热实验 | 第34-35页 |
2.2.7 表型实验 | 第35-36页 |
2.2.8 高效液相色谱实验(HPLC) | 第36-39页 |
3 结果与分析 | 第39-57页 |
3.1 EcaR基因克隆和蛋白质纯化 | 第39-41页 |
3.1.1 EcaR基因克隆 | 第39-41页 |
3.1.2 His-EcaR蛋白质纯化 | 第41页 |
3.2 凝胶阻滞实验(EMSA)证实EcaR与自身启动子特异性结合 | 第41-43页 |
3.3 c-di-GMP刺激EcaR的DNA结合活性 | 第43-46页 |
3.3.1 紫外交联实验证实EcaR为c-di-GMP受体 | 第43-44页 |
3.3.2 c-di-GMP促进EcaR与自身启动子的结合 | 第44-46页 |
3.4 EMB刺激EcaR的DNA结合活性 | 第46-49页 |
3.4.1 等温滴定量热法(ITC)证实乙胺丁醇能特异性结合EcaR | 第46-47页 |
3.4.2 乙胺丁醇(EMB)促进EcaR与自身启动子的结合 | 第47-49页 |
3.5 EcaR影响耻垢分枝杆菌表型 | 第49-53页 |
3.5.1 EcaR影响耻垢分枝杆菌菌落形态 | 第49-50页 |
3.5.2 EcaR影响耻垢分枝杆菌细胞长度和通透性 | 第50-53页 |
3.6 EcaR影响耻垢分枝杆菌细胞壁糖的代谢 | 第53-57页 |
4 总结与讨论 | 第57-61页 |
4.1 总结 | 第57-58页 |
4.2 讨论 | 第58-61页 |
参考文献 | 第61-74页 |
致谢 | 第74-75页 |