| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 植物体内过氧化氢（H_2O_2）的产生及清除 | 第13-15页 |
| 1.2 光呼吸代谢关键酶过氧化氢酶（CAT）的研究概况 | 第15-18页 |
| 1.3 CAT的调控研究 | 第18-20页 |
| 1.4 本研究目的与意义 | 第20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.2 菌株与载体 | 第20-23页 |
| 2.2.1 细菌菌株 | 第20页 |
| 2.2.2 质粒载体 | 第20-23页 |
| 2.3 扩增引物 | 第23-25页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.5 主要试剂药品 | 第26页 |
| 2.6 主要溶液及试剂配方 | 第26-31页 |
| 2.6.1 1000×木村B营养液母液 | 第26-27页 |
| 2.6.2 植物培养基母液 | 第27页 |
| 2.6.3 微生物培养基 | 第27页 |
| 2.6.4 抗生素母液 | 第27-28页 |
| 2.6.5 原生质体游离及转化所需试剂 | 第28页 |
| 2.6.6 蛋白电泳所需试剂 | 第28-30页 |
| 2.6.7 Western Bloting所需试剂 | 第30页 |
| 2.6.8 RAN抽取所需试剂 | 第30-31页 |
| 2.6.9 测酶活所需试剂 | 第31页 |
| 2.6.10 酵母转化所需溶液配方 | 第31页 |
| 2.6.11 微生物破碎及蛋白亲和纯化所需配方 | 第31页 |
| 2.6.12 包涵体纯化所需配方 | 第31页 |
| 2.7 生物信息学分析工具 | 第31-32页 |
| 2.8 载体构建及转化 | 第32-34页 |
| 2.8.1 反转录cDNA第一链的合成 | 第32页 |
| 2.8.2 目的片段的扩增 | 第32页 |
| 2.8.3 目的片段的连接 | 第32-33页 |
| 2.8.4 大肠杆菌感受态的制备及热激转化 | 第33页 |
| 2.8.5 质粒提取及阳性质粒的鉴定 | 第33页 |
| 2.8.6 阳性克隆序列测定及分析 | 第33页 |
| 2.8.7 农杆菌细胞感受态制备及转冻转化 | 第33-34页 |
| 2.8.8 农杆菌转化子稳定性鉴定 | 第34页 |
| 2.9 水稻亚细胞定位及BiFC | 第34-35页 |
| 2.9.1 原生质体游离酶解液配制 | 第34页 |
| 2.9.2 水稻茎和叶鞘细胞原生质体游离 | 第34-35页 |
| 2.9.3 原生质体转化 | 第35页 |
| 2.10 原核表达及蛋白纯化 | 第35-38页 |
| 2.10.1 相关基因完整序列的表达 | 第35页 |
| 2.10.2 SDS-PAGE检测目的蛋白的表达 | 第35-36页 |
| 2.10.3 可溶性蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| 2.10.4 蛋白含量的测定 | 第37页 |
| 2.10.5 Western bloting | 第37页 |
| 2.10.6 包涵体纯化变性蛋白 | 第37-38页 |
| 2.11 材料的培养与取样 | 第38页 |
| 2.12 叶片总mRNA提取（Trizol） | 第38页 |
| 2.13 定量PCR检测mRNA表达量 | 第38-39页 |
| 2.14 CAT酶活测定 | 第39页 |
| 2.15 酿酒酵母的转化及目的蛋白的诱导表达 | 第39-40页 |
| 2.15.1 转化酿酒酵母 | 第39-40页 |
| 2.15.2 目的蛋白的诱导表达 | 第40页 |
| 2.16 酵母细胞破碎及CAT蛋白的亲和纯化 | 第40页 |
| 2.16.1 酵母细胞破碎 | 第40页 |
| 2.16.2 CAT的亲和纯化 | 第40页 |
| 2.17 CAT的CN-PAGE及活性染色 | 第40-41页 |
| 2.17.1 CAT的CN-PAGE | 第40页 |
| 2.17.2 CAT的活性染色 | 第40-41页 |
| 2.18 CAT酶学动力学测定 | 第41页 |
| 2.19 数据处理与分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-69页 |
| 3.1 OsCAT生物信息学分析 | 第42-44页 |
| 3.2 OsCAT亚细胞定位 | 第44-46页 |
| 3.2.1 CAT亚细胞定位载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.2 OsCAT的亚细胞定位 | 第45-46页 |
| 3.3 水稻CAT同工酶谱 | 第46-48页 |
| 3.3.1 pYES2-CAT载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.3.2 酵母表达CAT与水稻叶片CAT同工酶谱比较 | 第47-48页 |
| 3.4 OsCATC的酶学特性 | 第48-51页 |
| 3.4.1 pYES3-Nhis-CATC载体构建 | 第48-49页 |
| 3.4.2 OsCATC的酶动力学特性 | 第49-51页 |
| 3.5 OsNCA生物信息学分析 | 第51-53页 |
| 3.6 OsNCA在水稻中的表达特性分析 | 第53-56页 |
| 3.6.1 OsNCA组织特异性表达分析 | 第53-54页 |
| 3.6.2 不同叶期叶片里OsNCA表达模式差异 | 第54-55页 |
| 3.6.3 不同处理时叶片里OsNCA表达模式差异 | 第55-56页 |
| 3.7 OsNCA亚细胞定位 | 第56-58页 |
| 3.7.1 DI-eGFPc-OsNCA载体和DI -OsNCA-eGFPn载体的构建 | 第56-57页 |
| 3.7.2 OsNCA亚细胞定位 | 第57-58页 |
| 3.8 OsNCA与OsCATC的BiFC分析 | 第58-61页 |
| 3.8.1 OsNCA的BiFC载体构建 | 第59页 |
| 3.8.2 OsNCA与OsCATC的Bi FC结果 | 第59-61页 |
| 3.9 OsNCA原核表达与抗原制备 | 第61-63页 |
| 3.9.1 pET28a-NCA载体的构建 | 第61-62页 |
| 3.9.2 NCA原核诱导 | 第62-63页 |
| 3.9.3 水稻叶粗酶液anti-NCA的western blot | 第63页 |
| 3.10 OsNCA与OsCATC原核共表达分析 | 第63-69页 |
| 3.10.1 pETDuet1-Nhis CATC-NCA载体构建 | 第64-65页 |
| 3.10.2 pETDuet1-Nhis CATC-NCA的诱导表达 | 第65页 |
| 3.10.3 Nhis CATC+NCA的pulldown分析 | 第65-66页 |
| 3.10.4 NCA对CATC活性有促进作用 | 第66-69页 |
| 4 讨论与结论 | 第69-73页 |
| 4.1 水稻CAT亚细胞定位及酶学特性 | 第69-70页 |
| 4.2 水稻过氧化氢酶互作蛋白NCA的研究 | 第70-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
