| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 犬乳腺肿瘤 | 第11-13页 |
| 1.1.1 犬乳腺肿瘤的发病因素 | 第11-12页 |
| 1.1.2 犬乳腺肿瘤的生物学特性 | 第12页 |
| 1.1.3 犬乳腺肿瘤的临床症状与诊断 | 第12-13页 |
| 1.1.4 犬乳腺肿瘤的治疗 | 第13页 |
| 1.2 肿瘤与细胞的凋亡 | 第13-16页 |
| 1.2.1 细胞的凋亡发现及起源 | 第13-14页 |
| 1.2.2 细胞凋亡与细胞坏死的区别 | 第14页 |
| 1.2.3 细胞凋亡的相关因子 | 第14-15页 |
| 1.2.4 细胞凋亡的激活机制 | 第15-16页 |
| 1.3 多柔比星 | 第16-18页 |
| 1.3.1 多柔比星的历史 | 第16-17页 |
| 1.3.2 多柔比星的性状 | 第17页 |
| 1.3.3 多柔比星抗肿瘤的机制以及临床应用 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第18页 |
| 2.1.2 药品 | 第18页 |
| 2.1.3 主要化学试剂及生物制剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要仪器及耗材 | 第19页 |
| 2.1.5 主要试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 犬乳腺肿瘤细胞的复苏、传代与冻存 | 第20-21页 |
| 2.2.2 CHMp、CHMm细胞形态学观察及计数 | 第21页 |
| 2.2.3 CHMp及CHMm细胞生长曲线的绘制 | 第21页 |
| 2.2.4 多柔比星剂量筛选实验 | 第21-22页 |
| 2.2.5 多柔比星作用后CHMp、CHMm细胞的形态学观察 | 第22页 |
| 2.2.6 AO/EB双染色法检测多柔比星的细胞毒性 | 第22-23页 |
| 2.2.7 多柔比星诱导CHMp、CHMm细胞内的Caspase-3、6、8、9 活性检测 | 第23页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR法测定线粒体凋亡途径相关基因表达水平 | 第23-26页 |
| 2.2.9 Western Blotting法测定线粒体凋亡途径相关蛋白表达 | 第26-28页 |
| 2.2.10 试验数据的统计与分析 | 第28页 |
| 3 实验结果 | 第28-43页 |
| 3.1 CHMp、CHMm细胞生长曲线的绘制 | 第28-29页 |
| 3.2 CCK-8 法检测多柔比星对细胞增殖的抑制作用 | 第29-30页 |
| 3.3 多柔比星作用犬乳腺肿瘤细胞后的形态学观察 | 第30-32页 |
| 3.3.1 多柔比星作用CHMp细胞 24 h后的形态学观察 | 第31页 |
| 3.3.2 多柔比星作用CHMm细胞 24 h后的形态学观察 | 第31-32页 |
| 3.4 AO/EB双染色法实验结果 | 第32-34页 |
| 3.4.1 多柔比星作用CHMp细胞 24 h后AO/EB双染色法结果 | 第33页 |
| 3.4.2 多柔比星作用CHMm细胞 24 h后AO/EB双染色法结果 | 第33-34页 |
| 3.5 多柔比星作用犬乳腺肿瘤细胞后胞内凋亡蛋白Caspase的变化 | 第34-39页 |
| 3.5.1 多柔比星作用CHMp细胞 24 h后胞内凋亡蛋白Caspase的变化 | 第34-37页 |
| 3.5.2 多柔比星作用CHMm细胞 24h后胞内凋亡蛋白Caspase的变化 | 第37-39页 |
| 3.6 多柔比星作用犬乳腺肿瘤细胞凋亡后胞内凋亡因子mRNA变化 | 第39-42页 |
| 3.6.1 多柔比星作用CHMp细胞胞内凋亡因子mRNA表达的变化 | 第39-40页 |
| 3.6.2 多柔比星作用CHMm细胞胞内凋亡因子mRNA表达的变化 | 第40-42页 |
| 3.7 多柔比星作用犬乳腺肿瘤细胞凋亡后凋亡蛋白Bax表达量变化 | 第42-43页 |
| 3.7.1 多柔比星作用CHMp细胞后胞内Bax蛋白表达的变化 | 第42-43页 |
| 3.7.2 多柔比星作用CHMm细胞后胞内Bax蛋白表达的变化 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| 4.1 多柔比星对CHMp、CHMm细胞的抑制作用 | 第43-44页 |
| 4.2 多柔比星诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡的分子机制 | 第44-47页 |
| 4.2.1 多柔比星经由激活Caspase家族诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 4.2.2 多柔比星经由改变凋亡因子表达诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡 | 第45-47页 |
| 5 全文总结 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 附录A 内参及靶基因q-PCR扩增曲线及熔解曲线图 | 第52-58页 |
| 附录B 攻读学位期间发表论文 | 第58页 |
