| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-32页 |
| 1.1 转基因植物概述 | 第13-17页 |
| 1.1.1 转基因技术及发展 | 第13页 |
| 1.1.2 转基因作物种植 | 第13-16页 |
| 1.1.3 转基因作物提高全球农业生产力并且改善粮食供需矛盾 | 第16-17页 |
| 1.1.4 转基因作物的安全性 | 第17页 |
| 1.2 Bt基因与转Bt作物 | 第17-22页 |
| 1.2.1 Bt基因与Bt杀虫晶体蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.2 转Bt作物 | 第18-19页 |
| 1.2.3 棉花与其它作物的间种套作 | 第19页 |
| 1.2.4 土壤中Bt蛋白的来源 | 第19页 |
| 1.2.5 Bt蛋白在土壤中的生命历程 | 第19-20页 |
| 1.2.6 Bt蛋白对土壤生态的影响 | 第20-21页 |
| 1.2.7 Bt在土壤环境的代谢产物是否会转移、是否会影响其它物种 | 第21-22页 |
| 1.3 细胞分裂素 | 第22-25页 |
| 1.3.1 细胞分裂素类简介 | 第22-23页 |
| 1.3.2 6-BA | 第23-24页 |
| 1.3.3 6-BA的应用 | 第24页 |
| 1.3.4 6-BA的毒性和检测手段 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究相关研究技术 | 第25-30页 |
| 1.4.1 蛋白质原核表达 | 第25-26页 |
| 1.4.2 免疫亲和层析(IAC) | 第26-27页 |
| 1.4.3 放射性碘标记技术 | 第27页 |
| 1.4.4 免疫分析技术 | 第27-30页 |
| 1.5 研究目的、内容及技术路线 | 第30-32页 |
| 1.5.1 研究目的与意义 | 第30页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第30页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第30-32页 |
| 第二章 Bt Cry1Ac原核表达及免疫亲和层析方法的研究 | 第32-52页 |
| 2.1 试剂和材料 | 第32-36页 |
| 2.1.1 试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.2 材料和仪器 | 第33页 |
| 2.1.3 试剂配方 | 第33-36页 |
| 2.2 方法 | 第36-43页 |
| 2.2.1 Bt Cry1Ac的原核表达与纯化 | 第36-39页 |
| 2.2.2 棉花种子中Bt Cry1Ac蛋白的亲和纯化 | 第39-43页 |
| 2.3 结果与分析 | 第43-49页 |
| 2.3.1 Bt Cry1Ac蛋白的原核表达纯化 | 第43-45页 |
| 2.3.2 棉花种子中Bt Cry1Ac蛋白的亲和纯化 | 第45-49页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第49-52页 |
| 2.4.1 小结 | 第49-50页 |
| 2.4.2 讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 Bt Cry1Ac的代谢及代谢多肽向棉花间作套种作物之间的转移 | 第52-67页 |
| 3.1 试剂和材料 | 第52-53页 |
| 3.1.1 试剂 | 第52页 |
| 3.1.2 仪器 | 第52-53页 |
| 3.1.3 试剂配方 | 第53页 |
| 3.2 方法 | 第53-57页 |
| 3.2.1 Bt Cry1Ac蛋白酶解及多肽鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE | 第54页 |
| 3.2.3 大片段多肽序列测定 | 第54-55页 |
| 3.2.4 ~(125)I标记多肽 | 第55页 |
| 3.2.5 小麦和西瓜苗 | 第55-56页 |
| 3.2.6 施加~(125)I-多肽和检测放射性强度 | 第56-57页 |
| 3.2.7 放射性废弃物处理 | 第57页 |
| 3.3 结果与分析 | 第57-64页 |
| 3.3.1 Bt Cry1Ac蛋白酶解结果 | 第57-58页 |
| 3.3.2 Bt Cry1Ac蛋白代谢多肽鉴定 | 第58-61页 |
| 3.3.3 ~(125)I-多肽从土壤转移到小麦和西瓜幼苗组织 | 第61-64页 |
| 3.4 小结和讨论 | 第64-67页 |
| 3.4.1 小结 | 第64-65页 |
| 3.4.2 讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 Bt Cry1Ac代谢多肽片段对土壤微生物及棉花间作套种作物的影响 | 第67-80页 |
| 4.1 试剂和材料 | 第67-69页 |
| 4.1.1 试剂 | 第67页 |
| 4.1.2 仪器 | 第67-68页 |
| 4.1.3 试剂配方 | 第68-69页 |
| 4.2 方法 | 第69-74页 |
| 4.2.1 土壤中分离细菌 | 第69-70页 |
| 4.2.2 土壤肥力相关细菌生长试验 | 第70-71页 |
| 4.2.3 作物幼苗的多肽喷施实验 | 第71页 |
| 4.2.4 总可溶性蛋白分析 | 第71-72页 |
| 4.2.5 可溶性糖分析 | 第72页 |
| 4.2.6 SOD分析 | 第72-73页 |
| 4.2.7 叶绿素含量测定 | 第73-74页 |
| 4.3 结果与分析 | 第74-78页 |
| 4.3.1 大田土壤肥力相关细菌筛选结果 | 第74-75页 |
| 4.3.2 土壤肥力相关细菌生长结果 | 第75-78页 |
| 4.3.3 作物生理指标测定结果分析 | 第78页 |
| 4.4 小结和讨论 | 第78-80页 |
| 4.4.1 小结 | 第78-79页 |
| 4.4.2 讨论 | 第79-80页 |
| 第五章 6-BA单克隆抗体的制备 | 第80-91页 |
| 5.1 材料 | 第80-82页 |
| 5.1.1 试剂 | 第80-81页 |
| 5.1.2 仪器设备 | 第81页 |
| 5.1.3 动物和细胞 | 第81页 |
| 5.1.4 ELISA缓冲液 | 第81页 |
| 5.1.5 单克隆抗体制备用溶液 | 第81-82页 |
| 5.2 方法 | 第82-86页 |
| 5.2.1 完全抗原的制备 | 第82页 |
| 5.2.2 免疫小鼠 | 第82-83页 |
| 5.2.3 血清效价测定 | 第83页 |
| 5.2.4 血清特异性测定 | 第83-84页 |
| 5.2.5 制备单克隆抗体 | 第84-86页 |
| 5.2.6 鉴定单克隆抗体性质 | 第86页 |
| 5.3 结果与分析 | 第86-89页 |
| 5.3.1 抗原合成 | 第86-87页 |
| 5.3.2 mAb的制备 | 第87-88页 |
| 5.3.3 单克隆抗体的性质检测 | 第88-89页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第89-91页 |
| 5.4.1 小结 | 第89-90页 |
| 5.4.2 讨论 | 第90-91页 |
| 第六章 6-BA免疫分析方法的建立与应用 | 第91-100页 |
| 6.1 材料 | 第91-92页 |
| 6.1.1 试剂 | 第91页 |
| 6.1.2 仪器和耗材 | 第91-92页 |
| 6.1.3 缓冲液 | 第92页 |
| 6.2 方法 | 第92-95页 |
| 6.2.1 样品采集 | 第92-93页 |
| 6.2.2 建立icELISA方法 | 第93页 |
| 6.2.3 样品提取方法 | 第93-94页 |
| 6.2.4 添加回收试验 | 第94-95页 |
| 6.2.5 icELSIA检测实际样品 | 第95页 |
| 6.3 结果与分析 | 第95-98页 |
| 6.3.1 6-BA标准曲线 | 第95-96页 |
| 6.3.2 6-BA添加回收试验结果 | 第96-97页 |
| 6.3.3 6-BA在实际样品残留量的检测分析 | 第97-98页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第98-100页 |
| 6.4.1 小结 | 第98-99页 |
| 6.4.2 讨论 | 第99-100页 |
| 第七章 总结 | 第100-103页 |
| 7.1 结论 | 第100-102页 |
| 7.1.1 Bt Cry1Ac的代谢和多肽转移到其它作物研究 | 第100-101页 |
| 7.1.2 6-BA免疫分析法的建立及其在实际样品残留分析的应用 | 第101-102页 |
| 7.2 创新与不足 | 第102-103页 |
| 7.2.1 创新 | 第102页 |
| 7.2.2 不足 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 附录 | 第112-124页 |
| 附录1 Bt Cry1Ac-pGEX-4T-1全DNA序列(6724 bp) | 第112-116页 |
| 附录2 Bt降解的大片段多肽N端测序 | 第116-120页 |
| Bt降解1号大片段多肽N端测序结果 | 第116-118页 |
| Bt降解2号大片段多肽N端测序结果 | 第118-120页 |
| 附录3 三种细菌的16S rDNA序列测序结果及菌种系统发育树 | 第120-124页 |
| 固氮菌1号样本的16S rDNA序列测序结果(1387 bp) | 第120-121页 |
| 解钾细菌2号样本的16S rDNA序列测序结果(1421 bp) | 第121-122页 |
| 解有机磷1号样本的16S rDNA序列测序结果(1399 bp) | 第122-124页 |
| 作者简历 | 第124-125页 |
