| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩略词 | 第12-18页 |
| 引言 | 第18-29页 |
| 1 冠状病毒概述 | 第18-24页 |
| 1.1 冠状病毒的复制周期和反向遗传学技术发展 | 第20-22页 |
| 1.2 临床治疗冠状病毒感染策略 | 第22-23页 |
| 1.3 冠状病毒药物研发策略 | 第23-24页 |
| 2 髙通量药物筛选技术 | 第24-27页 |
| 2.1 高通量药物筛选靶标的选择 | 第25页 |
| 2.2 高通量药物筛选检测方法 | 第25-26页 |
| 2.3 反向遗传学技术在抗病毒高通量筛选中的应用举例 | 第26-27页 |
| 3 研究背景、目的总结及技术路线 | 第27-29页 |
| 材料和方法 | 第29-41页 |
| 1 材料 | 第29-31页 |
| 1.1 质粒、细胞、抗体和试剂 | 第29-30页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-41页 |
| 2.1 携带Rluc基因的全长HCoVs-OC43重组感染性克隆的构建 | 第31-33页 |
| 2.2 重组病毒的拯救与鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3 重组病毒生长曲线的测定 | 第35-36页 |
| 2.4 重组病毒遗传稳定性鉴定 | 第36-37页 |
| 2.5 报告病毒rOC43-ns2DelRluc的活体成像研究 | 第37页 |
| 2.6 基于Rluc报告基因的抗HCoV-OC43药物筛选 | 第37页 |
| 2.7 Z'因子(Z-factor)的计算 | 第37-38页 |
| 2.8 RNA干扰筛选抗宿主抗病毒基因 | 第38-39页 |
| 2.9 双荧光素酶报告分析 | 第39页 |
| 2.10 定量RT-PCR检测宿主基因表达量 | 第39-40页 |
| 2.11 统计学分析 | 第40-41页 |
| 结果 | 第41-68页 |
| 第一部分 高效表达海肾荧光素酶基因的重组HCoV-OC43的拯救及人冠状病毒OC43易感细胞系的高效筛选 | 第41-55页 |
| 第一节 高效表达海肾荧光素酶基因的重组HCoV-OC43的拯救 | 第41-51页 |
| 1.1 重组HCoV-OC43全长感染性克隆的鉴定 | 第41-42页 |
| 1.2 重组HCoV-OC43免疫荧光鉴定结果 | 第42页 |
| 1.3 重组HCoV-OC43的生长曲线 | 第42-43页 |
| 1.4 rOC43-ns2DelRluc表达Rluc基因的能力最强 | 第43-44页 |
| 1.5 rOC43-ns2DelRluc在体内和体外均具有较强的遗传稳定性 | 第44-46页 |
| 1.6 ns2基因的缺失不影响rOC43-ns2DelRluc对小鼠的致病性 | 第46-47页 |
| 1.7 HCoV-OC43主要感染小鼠神经系统 | 第47-48页 |
| 1.8 讨论 | 第48-50页 |
| 1.9 小结 | 第50-51页 |
| 第二节 人冠状病毒OC43易感细胞系的高效筛选 | 第51-55页 |
| 2.1 HCoV-OC43易感细胞系的筛选结果 | 第51-52页 |
| 2.2 HCoV-OC43对筛选获得的细胞不产生病变效应 | 第52页 |
| 2.3 HCoV-OC43在4种易感细胞系中的复制动力学 | 第52-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-54页 |
| 2.5 小结 | 第54-55页 |
| 第二部分 人冠状病毒OC43高通量筛选平台的建立与初步应用 | 第55-68页 |
| 第一节 高通量抗冠状病毒药物筛选平台的建立与初步筛选 | 第55-61页 |
| 1.1 氯喹对rOC43-ns2DelRluc的Rluc活性具有明显抑制效果 | 第55-56页 |
| 1.2 低浓度病毒唑对rOC43-ns2DelRluc的Rluc活性抑制效果不明显 | 第56-57页 |
| 1.3 rOC43-ns2DelRluc能够用于高通量药物筛选 | 第57-58页 |
| 1.4 基于rOC43-ns2DelRluc的高通量药物筛选结果 | 第58-59页 |
| 1.5 讨论 | 第59-60页 |
| 1.6 小结 | 第60-61页 |
| 第二节 抗人冠状病毒OC43宿主基因的筛选与鉴定 | 第61-68页 |
| 2.1 限制HCoV-OC43复制的宿主基因筛选结果 | 第61-62页 |
| 2.2 PKR通过自身磷酸化并激活eIF2α发挥限制HCoV-OC43复制的功能 | 第62-64页 |
| 2.3 DDX3X通过刺激IFN-β的产生发挥限制HCoV-OC43复制的功能 | 第64-65页 |
| 2.4 讨论 | 第65-67页 |
| 2.5 小结 | 第67-68页 |
| 全文总结 | 第68-70页 |
| 一 主要研究结果 | 第68页 |
| 二 本论文主要创新点 | 第68-69页 |
| 三 尚待进一步解决的问题 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-83页 |
| 发表综述 | 第83-94页 |
| 参考文献 | 第90-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 个人简历 | 第96页 |
