符号说明 | 第4-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
1 引言 | 第12-21页 |
1.1 GRAS转录因子家族的结构 | 第12-13页 |
1.2 GRAS转录因子家族的分类 | 第13-14页 |
1.3 GRAS转录因子家族的功能 | 第14-19页 |
1.3.1 SCR/SHR与根及茎的极性生长 | 第14-15页 |
1.3.2 SCL3/DELLA与GA信号转导途径 | 第15-16页 |
1.3.3 HAM与茎分生组织的形成 | 第16页 |
1.3.4 LS与腋芽发育过程 | 第16-17页 |
1.3.5 PAT1/SCL13与光敏色素相关的信号转导途径 | 第17页 |
1.3.6 LISCL与生长素及胁迫下的信号转导途径 | 第17-18页 |
1.3.7 其他GRAS蛋白的功能 | 第18-19页 |
1.4 本研究的目的及意义 | 第19-21页 |
2 材料和方法 | 第21-39页 |
2.1 实验材料 | 第21-28页 |
2.1.1 植物材料 | 第21页 |
2.1.2 植物材料培养与处理 | 第21页 |
2.1.3 酶及生化试剂 | 第21页 |
2.1.4 菌株和质粒 | 第21-22页 |
2.1.5 PCR引物 | 第22-26页 |
2.1.6 培养基 | 第26-28页 |
2.2 实验方法 | 第28-39页 |
2.2.1 GRAS家族生物信息学分析 | 第28-29页 |
2.2.2 玉米不同部位GRAS基因的表达分析 | 第29-30页 |
2.2.2.1 植物材料总RNA提取 | 第29页 |
2.2.2.2 RNA反转录形成cDNA第一链 | 第29-30页 |
2.2.2.3 实时定量PCR | 第30页 |
2.2.3 基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
2.2.4 ZmGRAS基因的克隆以及载体构建 | 第31-36页 |
2.2.4.1 ZmGRAS基因的克隆 | 第31页 |
2.2.4.2 琼脂糖凝胶胶回收(Axygen) | 第31-32页 |
2.2.4.3 连接克隆载体 | 第32页 |
2.2.4.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
2.2.4.5 热激法转化大肠杆菌 | 第33页 |
2.2.4.6 菌落PCR鉴定 | 第33-34页 |
2.2.4.7 提取质粒(康为世纪高纯度质粒小提取试剂盒) | 第34页 |
2.2.4.8 酶切以及连接反应 | 第34-35页 |
2.2.4.9 农杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
2.2.4.10 冻融法转化农杆菌感受态 | 第35-36页 |
2.2.5 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第36页 |
2.2.6 农杆菌侵染法介导的短柄草遗传转化 | 第36-37页 |
2.2.6.1 愈伤组织诱导 | 第36页 |
2.2.6.2 侵染与共培养 | 第36-37页 |
2.2.6.3 筛选阶段 | 第37页 |
2.2.6.4 分化及生根阶段 | 第37页 |
2.2.7 转基因植株的鉴定 | 第37-39页 |
2.2.7.1 转基因拟南芥的鉴定 | 第37-38页 |
2.2.7.2 转基因二穗短柄草的鉴定 | 第38-39页 |
3 结果与分析 | 第39-55页 |
3.1 ZmGRAS转录因子家族生物信息学分析 | 第39-49页 |
3.1.1 ZmGRAS基因的确定 | 第39-42页 |
3.1.2 ZmGRAS蛋白序列与拟南芥、水稻、高粱的系统进化树分析 | 第42-43页 |
3.1.3 ZmGRAS蛋白保守结构域分析 | 第43-44页 |
3.1.4 ZmGRAS基因结构分析 | 第44-47页 |
3.1.5 ZmGRAS基因染色体定位 | 第47-48页 |
3.1.6 ZmGRAS基因启动子顺式作用元件分析 | 第48页 |
3.1.7 ZmGRAS基因表达谱分析 | 第48-49页 |
3.2 部分ZmGRAS基因在玉米中的表达分析 | 第49-51页 |
3.3 ZmGRAS基因的克隆及载体构建 | 第51-52页 |
3.4 ZmGRAS基因在拟南芥中的功能分析 | 第52-53页 |
3.4.1 转基因拟南芥的鉴定 | 第52页 |
3.4.2 过表达ZmGRAS41和ZmGRAS74对拟南芥下胚轴的伸长的影响 | 第52-53页 |
3.4.3 过表达ZmGRAS39和ZmGRAS40对拟南芥开花时间的影响 | 第53页 |
3.5 ZmGRAS基因在二穗短柄草中的功能分析 | 第53-55页 |
3.5.1 转基因二穗短柄草的鉴定 | 第53页 |
3.5.2 过表达ZmGRAS47和ZmGRAS84对二穗短柄草株高的影响 | 第53-55页 |
4 讨论 | 第55-58页 |
5 结论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-67页 |
致谢 | 第67-68页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第68页 |