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水貂肠炎细小病毒分离株的分子生物学特性及其致病性研究

中文摘要第9-11页
Abstract第11-12页
前言第13-14页
1 综述第14-25页
    1.1 食肉动物细小病毒第14-17页
        1.1.1 食肉动物细小病毒简介第14-15页
        1.1.2 食肉动物细小病毒分子生物学特性第15-16页
        1.1.3 食肉动物细小病毒复制机制第16页
        1.1.4 食肉动物细小病毒的抗原特性第16-17页
    1.2 水貂肠炎细小病毒性的病原性第17-18页
        1.2.1 流行病学第17-18页
        1.2.2 临床症状第18页
    1.3 水貂肠炎细小病毒的分子生物学特性第18-21页
        1.3.1 理化与增殖特性第18-19页
        1.3.2 基因组成第19页
        1.3.3 致病机理第19-20页
        1.3.4 基因组末端的功能第20-21页
    1.4 水貂肠炎细小病毒的编码蛋白及其功能第21-23页
        1.4.1 结构蛋白第21-22页
        1.4.2 非结构蛋白第22-23页
    1.5 水貂肠炎细小病毒跨种间传播的特点第23-24页
    1.6 水貂肠炎细小病毒的诊断和防治第24-25页
        1.6.1 诊断第24页
        1.6.2 防治第24-25页
    1.7 本研究的目的和意义第25页
2 材料与方法第25-37页
    2.1 材料第25-28页
        2.1.1 病料和血清第25页
        2.1.2 细胞第25-26页
        2.1.3 实验动物第26页
        2.1.4 主要仪器和试剂第26-27页
            2.1.4.1 主要仪器第26页
            2.1.4.2 主要试剂第26页
            2.1.4.3 主要试剂的配制第26-27页
        2.1.5 引物第27-28页
        2.1.6 参考毒株序列第28页
    2.2 试验方法第28-37页
        2.2.1 病毒的分离第28-29页
            2.2.1.1 检测引物的设计第28页
            2.2.1.2 病料处理第28页
            2.2.1.3 病毒分离培养第28-29页
        2.2.2 血清中和抗体滴度的测定第29-30页
            2.2.2.1 TCID50的测定第29页
            2.2.2.2 中和抗体效价测定第29-30页
        2.2.3 细小病毒VP2和NS1基因组的克隆测序第30-34页
            2.2.3.1 病毒基因组DNA的提取第30-31页
            2.2.3.2 NS1、VP2基因组的扩增第31页
            2.2.3.3 1%琼脂糖凝胶电泳第31页
            2.2.3.4 目的片段的回收纯化第31-32页
            2.2.3.5 重组载体的构建第32页
            2.2.3.6 DH5α感受态细胞制备第32-33页
            2.2.3.7 重组载体的转化第33页
            2.2.3.8 重组质粒的提取第33-34页
            2.2.3.9 重组质粒的酶切鉴定以及测序第34页
        2.2.4 8 株细小病毒的基因序列分析第34-35页
        2.2.5 MEV-SD1对水貂的致病性实验第35-37页
            2.2.5.1 攻毒实验第35页
            2.2.5.2 临床检测第35页
            2.2.5.3 血清学检查第35页
            2.2.5.4 病理组织学检查第35-37页
3 结果第37-47页
    3.0 PCR初步检测结果第37页
    3.1 病毒的分离第37-38页
    3.2 血清抗体滴度测定结果第38-39页
    3.3 NS1和VP2基因的PCR扩增结果第39-40页
    3.4 NS1和VP2基因的基因序列分析第40-44页
        3.4.1 核苷酸序列分析第40-41页
        3.4.2 氨基酸序列分析第41-43页
        3.4.3 遗传进化分析第43-44页
    3.5 动物致病性实验结果第44-47页
        3.5.1 临床症状观察第44-46页
        3.5.2 剖检病理学观察第46页
        3.5.3 血清学检测第46页
        3.5.4 排毒情况的检测第46-47页
        3.5.5 组织病理学观察第47页
4 讨论第47-51页
5 结论第51-52页
6 参考文献第52-60页
7 附录第60-71页
8 致谢第71-72页
9 攻读学位期间发表论文文情况情况第72页

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