| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第18-26页 |
| 1.1 微孢子虫概述 | 第18-21页 |
| 1.1.1 微孢子虫的形态、结构特征 | 第18-19页 |
| 1.1.2 微孢子虫的生活周期 | 第19页 |
| 1.1.3 微孢子虫的侵染机制 | 第19-20页 |
| 1.1.4 微孢子虫侵染相关蛋白的研究 | 第20-21页 |
| 1.2 层粘连蛋白概述 | 第21-23页 |
| 1.2.1 层粘连蛋白的分子结构及命名 | 第22页 |
| 1.2.2 层粘连蛋白的受体和功能 | 第22-23页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 1.4 研究内容 | 第24-26页 |
| 第2章 家蚕微孢子虫假定层粘连蛋白基因Nb HLAMA2、Nb HLAMB4的克隆及序列分析 | 第26-34页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.1 主要材料与试剂 | 第26页 |
| 2.2.2 主要实验仪器和设备 | 第26页 |
| 2.2.3 生物信息学工具软件 | 第26-27页 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.3.1 家蚕微孢子虫基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.3.2 家蚕微孢子虫假定层粘连蛋白基因Nb HLAMA2、Nb HLAMB4的克隆 | 第27-29页 |
| 2.3.3 基因序列分析 | 第29页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第29-32页 |
| 2.4.1 基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.4.2 基因序列分析 | 第30-32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-34页 |
| 第3章 家蚕微孢子虫假定层粘连蛋白基因Nb HLAMA2、Nb HLAMB4的转录分析 | 第34-40页 |
| 3.1 前言 | 第34页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第34页 |
| 3.2.1 主要材料与试剂 | 第34页 |
| 3.2.2 主要实验仪器和设备 | 第34页 |
| 3.2.3 主要试剂的配置 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.3.1 病原接种 | 第34-35页 |
| 3.3.2 家蚕中肠总RNA的提取 | 第35页 |
| 3.3.3 RNA的纯度、浓度测定 | 第35-36页 |
| 3.3.4 反转录实验 | 第36页 |
| 3.3.5 实时荧光定量PCR | 第36-37页 |
| 3.3.6 实时荧光定量PCR的结果分析 | 第37页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.4.1 Nb HLAMA2基因转录活性分析 | 第37-38页 |
| 3.4.2 Nb HLAMB4基因转录活性分析 | 第38-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39-40页 |
| 第4章 家蚕微孢子虫假定层粘连蛋白Nb HLAMA2、Nb HLAMB4的原核表达及抗体制备 | 第40-56页 |
| 4.1 前言 | 第40页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第40-43页 |
| 4.2.1 主要材料与试剂 | 第40页 |
| 4.2.2 主要实验仪器和设备 | 第40-41页 |
| 4.2.3 主要试剂的配制 | 第41-43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-47页 |
| 4.3.1 Nb HLAMA2、Nb HLAMB4基因的PCR扩增 | 第43页 |
| 4.3.2 PCR产物的连接、转化 | 第43-44页 |
| 4.3.3 重组表达载体的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.4 融合蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| 4.3.5 融合蛋白的纯化 | 第45页 |
| 4.3.6 蛋白浓度测定 | 第45-46页 |
| 4.3.7 Western blot分析检测目的蛋白表达 | 第46-47页 |
| 4.3.8 多克隆抗体的制备及抗体效价检测 | 第47页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第47-53页 |
| 4.4.1 Nb HLAMA2、Nb HLAMB4原核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.4.2 Nb HLAMA2的原核表达及纯化 | 第48-50页 |
| 4.4.3 Nb HLAMB4的原核表达及纯化 | 第50-53页 |
| 4.5 讨论 | 第53-56页 |
| 第5章 家蚕微孢子虫Nb HLAMA2的定位分析及功能初探 | 第56-62页 |
| 5.1 前言 | 第56页 |
| 5.2 材料与试剂 | 第56-57页 |
| 5.2.1 主要材料与试剂 | 第56页 |
| 5.2.2 主要实验仪器和设备 | 第56页 |
| 5.2.3 主要试剂的配制 | 第56-57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-58页 |
| 5.3.1 家蚕微孢子虫的收集 | 第57页 |
| 5.3.2 家蚕微孢子虫的纯化 | 第57页 |
| 5.3.3 免疫电镜实验 | 第57-58页 |
| 5.3.4 宿主细胞粘附实验 | 第58页 |
| 5.3.5 抗体封闭实验 | 第58页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第58-61页 |
| 5.4.1 家蚕微孢子虫Nb HLAMA2的亚细胞定位研究 | 第58-59页 |
| 5.4.2 家蚕微孢子虫Nb HLAMA2与Bm N细胞粘附分析 | 第59-60页 |
| 5.4.3 家蚕微孢子虫Nb HLAMA2抗体对孢子粘附的影响 | 第60-61页 |
| 5.5 讨论 | 第61-62页 |
| 第6章 家蚕微孢子虫Nb HLAMB4互作蛋白的筛选 | 第62-70页 |
| 6.1 前言 | 第62页 |
| 6.2 材料与试剂 | 第62-63页 |
| 6.2.1 主要材料与试剂 | 第62页 |
| 6.2.2 主要实验仪器和设备 | 第62页 |
| 6.2.3 主要试剂的配制 | 第62-63页 |
| 6.3 实验方法 | 第63-65页 |
| 6.3.1 诱饵载体的构建 | 第63页 |
| 6.3.2 酵母的转化 | 第63-64页 |
| 6.3.3 诱饵蛋白的毒性检测和自激活检测 | 第64页 |
| 6.3.4 酵母双杂交 | 第64-65页 |
| 6.3.5 筛选目的基因转入大肠杆菌 | 第65页 |
| 6.4 实验结果与分析 | 第65-67页 |
| 6.4.1 重组诱饵载体的构建 | 第65-66页 |
| 6.4.2 诱饵蛋白无毒性和无自激活性鉴定 | 第66页 |
| 6.4.3 重组酵母质粒的鉴定 | 第66页 |
| 6.4.4 酵母双杂交初筛的互作候选蛋白 | 第66-67页 |
| 6.5 讨论 | 第67-70页 |
| 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录 | 第76-82页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
