| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 棉花黄萎病 | 第10-11页 |
| 1.2 黄萎病菌致病机理 | 第11-12页 |
| 1.3 棉花抗黄萎病机制 | 第12-17页 |
| 1.3.1 基因对基因学说 | 第12-13页 |
| 1.3.2 组织结构抗性 | 第13-14页 |
| 1.3.3 生理生化抗性 | 第14-15页 |
| 1.3.4 植物抗病信号网络 | 第15-17页 |
| 1.4 WRKY转录因子在植物抗病中的功能研究 | 第17-20页 |
| 1.4.1 WRKY转录因子的结构特点 | 第17-18页 |
| 1.4.2 WRKY转录因子在植物抗病中的作用 | 第18页 |
| 1.4.3 WRKY转录因子在植物激素信号传导中的作用 | 第18-19页 |
| 1.4.4 转录因子WRKY40 和WRKY70 的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 材料方法 | 第22-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要菌株和载体 | 第22页 |
| 2.1.3 主要酶类和试剂 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 棉花幼苗的激素外源处理 | 第22-23页 |
| 2.2.2 棉花根系RNA的提取及浓度测定 | 第23页 |
| 2.2.3 RT-PCR 和 q RT-PCR 分析方法 | 第23-25页 |
| 2.2.4 病原菌的活化和培养 | 第25-26页 |
| 2.2.5 棉花幼苗黄萎病病原菌接种处理 | 第26-27页 |
| 2.2.6 病株剖杆和病原菌恢复培养 | 第27页 |
| 2.2.7 GhWRKY40-like和GhWRKY70 的克隆及序列分析 | 第27页 |
| 2.2.8 载体构建及遗传转化 | 第27-29页 |
| 2.2.9 GhWRKY40-like和GhWRKY70 表达模式分析 | 第29页 |
| 2.2.10 转基因植株阳性鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.11 转基因植株的Southern鉴定 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-45页 |
| 3.1 WRKY转录因子GhWRKY40-like和GhWRKY70 在棉花中的序列分析 | 第31-32页 |
| 3.2 GhWRKY40-like和GhWRKY70 表达模式分析 | 第32-35页 |
| 3.2.1 GhWRKY40-like和GhWRKY70 在陆地棉不同组织的表达分析 | 第32-33页 |
| 3.2.2 GhWRKY40-like和GhWRKY70 在陆地棉接种黄萎病后表达分析 | 第33-34页 |
| 3.2.3 GhWRKY40-like和GhWRKY70 在相关激素诱导后的表达分析 | 第34-35页 |
| 3.3 GhWRKY40-like和GhWRKY70 的转基因后代植株的鉴定 | 第35-38页 |
| 3.3.1 利用PT-PCR技术鉴定转基因植株的干涉效果 | 第35-36页 |
| 3.3.2 转基因植株的拷贝数的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.3 转基因植株干涉效果的qRT-PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4 转基因株系接种黄萎病菌的抗病性鉴定及分析 | 第38-45页 |
| 3.4.1 GhWRKY40-like负调控棉花对黄萎病菌的抗性反应 | 第38-39页 |
| 3.4.2 GhWRKR70 下调表达增强了棉花对黄萎病菌的抗性 | 第39-40页 |
| 3.4.3 转基因材料接种黄萎病后的恢复培养和茎秆侵染高度百分比统计 | 第40-42页 |
| 3.4.4 基因GhWRKY40-like和GhWRKR70 的表达量变化影响SA信号路径基因的表达 | 第42-43页 |
| 3.4.5 基因GhWRKY40-like和GhWRKR70 的表达量变化影响JA信号路径基因的表达 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 GhWRKY40-like与棉花抗黄萎病反应 | 第45页 |
| 4.2 GhWRKY40-like和GhWRKY70 与参与JA和SA信号路径 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-56页 |
| 附录 1．主要缓冲液的配制 | 第56-58页 |
| 附录 2．培养基配方 | 第58-59页 |
| 附录 3．棉花基因组DNA抽提方法 | 第59-61页 |
| 附录 4．棉花基因组RNA抽提方法 | 第61-62页 |
| 附录 5．Southern杂交步骤 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
