| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩写词表 | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 植物细胞壁的组成与结构特征 | 第13-14页 |
| 1.2 植物细胞壁果胶的合成及其调节 | 第14-18页 |
| 1.2.1 PME与PMEI基因家族特征 | 第15-17页 |
| 1.2.2 PMEI对PME的作用模式 | 第17-18页 |
| 1.3 细胞壁果胶与非生物胁迫之间的关系 | 第18-21页 |
| 1.3.1 PMEI在胁迫作用中的研究进展 | 第18页 |
| 1.3.2 植物在盐胁迫下抗逆性研究 | 第18-19页 |
| 1.3.3 植物在冷冻胁迫下抗性研究 | 第19-20页 |
| 1.3.4 PMEI与油菜素内脂之间的联系 | 第20-21页 |
| 1.4 高山离子芥耐寒机理研究 | 第21-22页 |
| 1.5 本论文的研究目的及意义 | 第22页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第22-37页 |
| 2.1 高山离子芥Cb4773基因克隆 | 第22-29页 |
| 2.1.1 高山离子芥材料获取总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.1.2 高山离子芥RNA提取及反转录 | 第23页 |
| 2.1.3 采用 3’RACE and 5’RACE技术获得Cb4773基因编码区序列 | 第23-27页 |
| 2.1.4 采用Tail PCR获得Cb4773基因 5’UTR上游序列 | 第27-29页 |
| 2.2 Gateway技术构建过表达载体及转化 | 第29-32页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.2.2 目的基因CDS区PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3 构建入门克隆及表达载体 | 第30-31页 |
| 2.2.4 农杆菌转化及转基因植株筛选 | 第31-32页 |
| 2.3 Gateway技术构建目的基因Promoter::GUS载体及转化 | 第32-33页 |
| 2.3.1 基因组DNA提取 | 第32页 |
| 2.3.2 目的基因启动子区PCR扩增 | 第32页 |
| 2.3.3 构建入门克隆及表达克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.4 农杆菌转化及转基因植株筛选 | 第33页 |
| 2.4 Cb4773和At5g62360非生物胁迫表达量检测 | 第33-34页 |
| 2.4.1 实验材料及处理 | 第33页 |
| 2.4.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 2.5 转基因植株gus染色 | 第34-35页 |
| 2.5.1 实验中引物设计 | 第34-35页 |
| 2.6 转基因植株耐冻性研究 | 第35页 |
| 2.6.1 实验材料及处理 | 第35页 |
| 2.6.2 LT50测定 | 第35页 |
| 2.7 转基因植株耐盐性研究 | 第35-36页 |
| 2.7.1 实验方法及处理 | 第35-36页 |
| 2.7.2 植株根长及成活率统计 | 第36页 |
| 2.8 PME活性测定 | 第36页 |
| 2.9 脯氨酸及总糖含量测定 | 第36-37页 |
| 第三章 实验结果 | 第37-61页 |
| 3.1 高山离子芥Cb4773基因序列获得及同源性分析 | 第37-42页 |
| 3.1.1 3’RACE and 5’RACE技术克隆获得Cb4773基因序列 | 第37-38页 |
| 3.1.2 序列同源性分析得到拟南芥果胶酯酶抑制酶家族基因 | 第38-41页 |
| 3.1.3 编码区克隆载体构建 | 第41-42页 |
| 3.2 启动子序列获得及顺势作用元件分析 | 第42-44页 |
| 3.2.1 Tail PCR获取Cb4773启动子序列 | 第42页 |
| 3.2.2 启动子序列顺势作用元件分析 | 第42-44页 |
| 3.2.3 启动子克隆载体构建结果 | 第44页 |
| 3.3 转基因植株是否成功筛选及表达情况鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4 RT-PCR分析胁迫响应情况 | 第45-46页 |
| 3.5 Gus组织染色 | 第46-48页 |
| 3.6 亚细胞定位 | 第48页 |
| 3.7 Cb4773/At5g62360耐受性分析 | 第48-55页 |
| 3.7.1 过表达line的RT-PCR分析表达情况 | 第48-49页 |
| 3.7.2 过表达Cb4773/At5g62360抗冻性分析 | 第49-51页 |
| 3.7.3 过表达Cb4773/At5g62360抗盐性分析 | 第51-55页 |
| 3.8 过表达Cb4773/At5g62360PME活性及生理指标测定 | 第55-59页 |
| 3.8.1 过表达Cb4773/At5g62360脯氨酸和总糖测定 | 第55-58页 |
| 3.8.2 过表达Cb4773/At5g62360 PME活性测定 | 第58-59页 |
| 3.9 转基因Cb4773/At5g62360植株的表型 | 第59-60页 |
| 3.10 基因AtPME41部分恢复det2的表型 | 第60-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-64页 |
| 4.1 基因Cb4773与At5g62360在序列进化比较 | 第61页 |
| 4.2 启动子分析及亚细胞定位 | 第61-62页 |
| 4.3 过表达Cb4773和At5g62360提高抗冻性 | 第62页 |
| 4.4 过表达Cb4773和At5g62360改变PME活性及影响植物 | 第62-63页 |
| 4.5 AtPME41与BR之间的联系 | 第63-64页 |
| 第五章 结论及展望 | 第64-66页 |
| 5.1 主要结论 | 第64页 |
| 5.2 研究展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
