| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 概述 | 第14页 |
| 1.2 miRNA的特点、生物与合成及对靶基因的调控 | 第14-18页 |
| 1.2.1 miRNA的发现 | 第14-15页 |
| 1.2.2 miRNA的特点 | 第15-16页 |
| 1.2.3 miRNA的生物合成 | 第16-17页 |
| 1.2.4 植物miRNA调控靶基因的方式 | 第17页 |
| 1.2.5 植物与动物miRNA的区别 | 第17-18页 |
| 1.2.6 植物miRNA的进化 | 第18页 |
| 1.3 miRNA和靶基因的研究方法 | 第18-20页 |
| 1.3.1 植物miRNA研究方法 | 第18页 |
| 1.3.2 生物信息学预测miRNA靶基因 | 第18-19页 |
| 1.3.3 生物学实验方法 | 第19-20页 |
| 1.4 植物miRNA的生物学功能 | 第20-23页 |
| 1.4.1 植物miRNA参与非生物胁迫 | 第20-21页 |
| 1.4.2 植物miRNA参与生物胁迫 | 第21-22页 |
| 1.4.3 植物miRNA调节植物花的发育 | 第22-23页 |
| 1.4.4 植物miRNA调控叶的形态建成 | 第23页 |
| 1.5 桑树miRNA研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5.1 桑树miRNA的分离鉴定 | 第24页 |
| 1.6 农杆菌介导的植物瞬时转化技术 | 第24-26页 |
| 第二章 引言 | 第26-30页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第26页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第26-28页 |
| 2.3 技术路线 | 第28-30页 |
| 第三章 川桑miRn51序列及靶基因生物信息学分析 | 第30-48页 |
| 3.1 材料 | 第30-33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.2 主要生化试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 引物 | 第30-31页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.5 主要的试剂和缓冲液的配置 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-38页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第33页 |
| 3.2.2 利用茎环引物合成cDNA | 第33-34页 |
| 3.2.3 桑树基因组提取 | 第34-35页 |
| 3.2.4 川桑10个候选miRNA基因的获得 | 第35页 |
| 3.2.5 川桑miRn51序列分析和靶基因预测 | 第35页 |
| 3.2.6 川桑miRn51基因的克隆与序列鉴定 | 第35-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-45页 |
| 3.3.1 川桑miRNA的生物信息分析 | 第38-44页 |
| 3.3.2 川桑miRNA的克隆 | 第44-45页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第45-48页 |
| 第四章 桑树miRn51靶基因验证及胁迫诱导表达分析 | 第48-64页 |
| 4.1 材料和试剂仪器 | 第48页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第48页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-55页 |
| 4.2.1 桑树幼苗的培养 | 第48-49页 |
| 4.2.2 桑树幼苗的胁迫处理 | 第49页 |
| 4.2.3 RNA的提取与检测 | 第49页 |
| 4.2.4 利用茎环引物合成cDNA的第一链 | 第49页 |
| 4.2.5 桑树cDNA第一链的合成 | 第49-50页 |
| 4.2.6 桑树miRn51的潜在靶基因定量引物设计 | 第50页 |
| 4.2.7 桑树5'RACE验证miRn51的靶基因 | 第50-54页 |
| 4.2.8 桑树miRn51和靶基因的荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第54-55页 |
| 4.2.9 桑树PPO2功能结构域分析 | 第55页 |
| 4.2.10 桑树多酚氧化酶活性检测 | 第55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-61页 |
| 4.3.1 桑树miRn51与靶基因组织表达分析 | 第55-56页 |
| 4.3.2 桑树miRn51与靶基因5’RACE分析 | 第56-58页 |
| 4.3.3 桑树miRn51与靶基因胁迫表达分析 | 第58-60页 |
| 4.3.4 不同桑树品系中miRn51表达差异及MnPPO含量的测定 | 第60-61页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第61-64页 |
| 第五章 农杆菌介导的桑树瞬时表达体系的建立及miRn51与MnPPO2表达分析 | 第64-82页 |
| 5.1 实验材料和试剂 | 第64-68页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第64页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第64页 |
| 5.1.3 主要的仪器和设备 | 第64-65页 |
| 5.1.4 主要试剂和缓冲液配方 | 第65-68页 |
| 5.2 方法 | 第68-73页 |
| 5.2.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第68页 |
| 5.2.2 质粒的提取 | 第68-69页 |
| 5.2.3 植物超量表达载体的构建 | 第69-71页 |
| 5.2.4 农杆菌介导桑树瞬时转化 | 第71页 |
| 5.2.5 瞬时转化后检测转化效率 | 第71-73页 |
| 5.3 结果与分析 | 第73-80页 |
| 5.3.1 植物超表达量载体的构建 | 第73-74页 |
| 5.3.2 桑树瞬时表达体系的构建 | 第74-75页 |
| 5.3.3 不同条件下重组农杆菌菌液对桑树叶片的转染效率 | 第75-80页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第80-82页 |
| 第六章 综合与讨论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 在读期间发表文章及参研课题 | 第92-94页 |
| 附录 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
