| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 不育技术防治有害生物的生态学基础 | 第12页 |
| 1.2 免疫不育技术防治有害生物的机制 | 第12-13页 |
| 1.3 免疫不育抗原的种类 | 第13-14页 |
| 1.3.1 卵透明带（ZP）抗原 | 第13页 |
| 1.3.2 精子抗原 | 第13-14页 |
| 1.3.3 生殖激素抗原 | 第14页 |
| 1.4 卵透明带抗原的研究概述 | 第14-19页 |
| 1.4.1 ZP蛋白的结构和组成 | 第15页 |
| 1.4.2 ZP在生殖过程中的作用 | 第15-16页 |
| 1.4.3 ZP3蛋白的功能 | 第16页 |
| 1.4.4 ZP3作为目标抗原的优点 | 第16页 |
| 1.4.5 ZP糖蛋白疫苗的研究 | 第16-17页 |
| 1.4.6 ZP基因不育疫苗的研究 | 第17-19页 |
| 1.5 外源蛋白表达系统介绍 | 第19-21页 |
| 1.5.1 原核表达系统 | 第19页 |
| 1.5.2 毕赤酵母表达系统 | 第19-20页 |
| 1.5.3 CHO细胞表达系统 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的意义和主要内容 | 第21-22页 |
| 1.6.1 研究目的意义 | 第21页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 菌种、质粒与动物细胞 | 第22页 |
| 2.1.3 其他试剂及耗材（见表 2-1） | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 中华鼢鼠卵透明带 3（mZP3）真核表达载体pEGFP-mZP3的构建和鉴定 | 第24-29页 |
| 2.2.1.1 中华鼢鼠ZP3基因酶切位点的设计及酶切引物获得 | 第24-25页 |
| 2.2.1.2 带酶切位点的mZP3基因的获得 | 第25-26页 |
| 2.2.1.3 带酶切位点的mZP3基因胶回收并测其浓度 | 第26页 |
| 2.2.1.4 真核表达载体pEGFP-N1质粒小提 | 第26-27页 |
| 2.2.1.5 带酶切位点的mZP3基因和EGFP质粒分别进行双酶切 | 第27-28页 |
| 2.2.1.6 mZP3基因和EGFP载体进行连接 | 第28-29页 |
| 2.2.1.7 连接载体转化入感受态大肠杆菌细胞 | 第29页 |
| 2.2.1.8 重组质粒EGFP-mZP3的鉴定 | 第29页 |
| 2.2.2 重组质粒EGFP-mZP3转染CHO细胞及目的蛋白的表达 | 第29-32页 |
| 2.2.2.1 真核表达载体EGFP-mZP3的大量制备 | 第29-30页 |
| 2.2.2.2 中国仓鼠卵巢细胞（CHO）转染前的培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 重组载体EGFP-mZP3转染CHO细胞 | 第31页 |
| 2.2.2.4 转染CHO细胞重组RNA水平和蛋白的检测 | 第31-32页 |
| 2.2.3 抗生育疫苗pcDNA3.1-mZP3的构建 | 第32-34页 |
| 2.2.3.1 pcDNA3.1-mZP3的构建 | 第32-34页 |
| 2.2.3.2 pcDNA3.1-mZP3转染CHO细胞并验证表达产物 | 第34页 |
| 2.2.4 抗生育疫苗pcDNA3.1-mZP3大量制备并免疫小鼠 | 第34-36页 |
| 2.2.4.1 重组质粒pcDNA3.1-mZP3的大量制备 | 第34页 |
| 2.2.4.2 重组质粒免疫昆明小鼠 | 第34页 |
| 2.2.4.3 小鼠抗血清的采集 | 第34页 |
| 2.2.4.4 小鼠抗血清Elisa检测 | 第34-35页 |
| 2.2.4.5 免疫小鼠抗生育实验 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-45页 |
| 3.1 重组真核表达载体EGFP-mZP3的构建 | 第36-38页 |
| 3.1.1 加入酶切位点PCR扩增目的基因mZP3片段 | 第36-37页 |
| 3.1.2 EGFP-mZP3真核表达载体菌液PCR | 第37页 |
| 3.1.3 EGFP-mZP3真核表达载体的单、双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2 重组载体EGFP-mZP3转染CHO细胞 | 第38-41页 |
| 3.2.1 荧光显微镜下观察转染后的CHO细胞 | 第38-39页 |
| 3.2.2 RT-PCR检测EGFP-mZP3在CHO细胞中的表达 | 第39页 |
| 3.2.3 重组载体转染CHO细胞的WB检测 | 第39-41页 |
| 3.3 基因疫苗pcDNA3.1-mZP3载体的构建 | 第41-43页 |
| 3.3.1 pcDNA3.1-mZP3重组载体的单、双酶切验证 | 第41-42页 |
| 3.3.2 pcDNA3.1-mZP3重组载体转染CHO细胞 | 第42-43页 |
| 3.3.2.1 RT-PCR检测pcDNA3.1-mZP3在CHO细胞中的表达 | 第42页 |
| 3.3.2.2 WB检测pcDNA3.1-mZP3在CHO细胞中蛋白表达 | 第42-43页 |
| 3.4 基因疫苗pcDNA3.1-mZP3免疫小鼠 | 第43-45页 |
| 3.4.1 Elisa检测被免疫小鼠血清效价 | 第43-44页 |
| 3.4.2 小鼠抗生育检测 | 第44-45页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第45-47页 |
| 4.1 讨论 | 第45-46页 |
| 4.2 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
