| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略符号说明 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 革兰氏阴性菌及其毒力因子 | 第14-16页 |
| 1.1.1 革兰氏阴性菌 | 第14页 |
| 1.1.2 革兰氏阴性菌毒力因子 | 第14-16页 |
| 1.2 革兰氏阴性菌及其毒力因子检测方法 | 第16-19页 |
| 1.2.1 革兰氏阴性菌检测方法 | 第16-18页 |
| 1.2.2 革兰氏阴性菌毒力因子检测方法 | 第18-19页 |
| 1.3 生物传感技术与应用 | 第19-24页 |
| 1.3.1 生物传感器概述 | 第19-20页 |
| 1.3.2 生物传感器的工作原理 | 第20页 |
| 1.3.3 生物传感器的分类及其在检测革兰氏阴性菌中的应用 | 第20-24页 |
| 1.4 立题背景及意义 | 第24-25页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容 | 第25-28页 |
| 第二章 3D细胞电化学传感器检测革兰氏阴性菌脂多糖 | 第28-40页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.2 设备和仪器 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.3.2 一氧化氮的制备 | 第30页 |
| 2.3.3 电极修饰和细胞固定 | 第30页 |
| 2.3.4 细胞电化学检测LPS | 第30-31页 |
| 2.3.5 活性氧ROS的测定 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-38页 |
| 2.4.1 RAW264.7细胞电化学传感器的制备及工作原理 | 第32-33页 |
| 2.4.2 RAW264.7细胞电化学传感器电极表面修饰表征 | 第33-34页 |
| 2.4.3 RAW264.7细胞电化学传感器电化学行为的表征 | 第34-35页 |
| 2.4.4 RAW264.7细胞电化学传感器检测LPS研究 | 第35-37页 |
| 2.4.5 RAW264.7细胞电化学传感器抗干扰能力、重现性和稳定性研究 | 第37-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 荧光细胞钙离子传感器快速检测革兰氏阴性菌 | 第40-58页 |
| 3.1 引言 | 第40-41页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第41页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第41页 |
| 3.2.2 设备和仪器 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-46页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第41-42页 |
| 3.3.2 细菌培养 | 第42页 |
| 3.3.3 重组嵌合蛋白的构建、表达和纯化 | 第42页 |
| 3.3.4 SDS-PAGE和蛋白免疫印迹 | 第42-43页 |
| 3.3.5 免疫荧光实验 | 第43页 |
| 3.3.6 pLenti-CMV-GCaMP6(s)-2A-Tdtomato在RBL-2H3细胞中的表达 | 第43-44页 |
| 3.3.7 扫描电镜样品制备 | 第44页 |
| 3.3.8 细胞传感器检测研究 | 第44-45页 |
| 3.3.9 纯培养物中革兰氏阴性菌的检测 | 第45页 |
| 3.3.10 食品样品中革兰氏阴性菌的检测 | 第45页 |
| 3.3.11 RBL-2H3细胞β-己糖胺酶释放率测定 | 第45-46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-56页 |
| 3.4.1 荧光细胞钙离子传感器制备及工作原理 | 第46页 |
| 3.4.2 检测用IgE抗体的制备 | 第46-49页 |
| 3.4.3 慢病毒载体pLenti-CMV-GCaMP6(s)-2A-Tdtomato的构建 | 第49-50页 |
| 3.4.4 荧光细胞钙离子传感器的构建 | 第50-52页 |
| 3.4.5 RBL-2H3细胞检测模型的建立 | 第52-53页 |
| 3.4.6 纯培养物中革兰氏阴性菌的检测 | 第53-55页 |
| 3.4.7 食品样品中革兰氏阴性菌的检测 | 第55-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第四章 磁性分子印迹电化学传感器检测革兰氏阴性菌群体感应信号分子 | 第58-76页 |
| 4.1 引言 | 第58-59页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第59页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第59页 |
| 4.2.2 设备和仪器 | 第59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.3.1 N-酰基-高丝氨酸内酯的制备 | 第59页 |
| 4.3.2 Fe_3O_4@SiO_2-NH_2的制备 | 第59-60页 |
| 4.3.3 磁性分子印迹聚合物的制备 | 第60页 |
| 4.3.4 磁性分子印迹电化学传感器检测研究 | 第60-61页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第61-73页 |
| 4.4.1 磁性分子印迹电化学传感器的制备及工作原理 | 第61-62页 |
| 4.4.2 磁性分子印迹聚合物的表征 | 第62-67页 |
| 4.4.3 磁性分子印迹电化学传感器电化学行为的表征 | 第67-69页 |
| 4.4.4 磁性分子印迹电化学传感器的优化 | 第69-70页 |
| 4.4.5 磁性分子印迹电化学传感器检测研究 | 第70-71页 |
| 4.4.6 磁性分子印迹电化学传感器的特异性、重现性和稳定性研究 | 第71-73页 |
| 4.4.7 实际样品分析 | 第73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-76页 |
| 第五章 荧光细胞信号通路传感器识别革兰氏阴性菌脂多糖毒力 | 第76-96页 |
| 5.1 引言 | 第76-77页 |
| 5.2 材料与仪器 | 第77-78页 |
| 5.2.1 材料与试剂 | 第77页 |
| 5.2.2 设备和仪器 | 第77-78页 |
| 5.3 实验方法 | 第78-82页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第78页 |
| 5.3.2 pGL4.26-mcherry-NF-κB质粒的构建及鉴定 | 第78-79页 |
| 5.3.3 细胞转染 | 第79页 |
| 5.3.4 蛋白免疫印迹 | 第79页 |
| 5.3.5 细胞转染后细胞增殖活性分析 | 第79-80页 |
| 5.3.6 LPS的提取及SDS-PAGE分析 | 第80-81页 |
| 5.3.7 细胞传感器识别LPS研究 | 第81页 |
| 5.3.8 炎症因子TNF-α和IL-8的测定 | 第81-82页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第82-95页 |
| 5.4.1 细胞传感器的工作原理 | 第82页 |
| 5.4.2 细胞传感器的成功构建 | 第82-85页 |
| 5.4.3 基于TLR4信号通路激活的mCherry红色荧光蛋白表达的研究 | 第85-87页 |
| 5.4.4 细胞传感器的定量表征研究 | 第87-89页 |
| 5.4.5 细胞传感器评价多种细菌来源的LPS | 第89-95页 |
| 5.5 本章小结 | 第95-96页 |
| 第六章 肠道细胞对革兰氏阴性菌脂多糖反应的研究及细胞模型的筛选 | 第96-114页 |
| 6.1 引言 | 第96-97页 |
| 6.2 材料与仪器 | 第97页 |
| 6.2.1 材料与试剂 | 第97页 |
| 6.2.2 设备和仪器 | 第97页 |
| 6.3 实验方法 | 第97-100页 |
| 6.3.1 细胞培养 | 第97-98页 |
| 6.3.2 蛋白免疫印迹 | 第98页 |
| 6.3.3 细胞表面直接免疫荧光 | 第98页 |
| 6.3.4 MTT实验 | 第98页 |
| 6.3.5 RT-PCR实验 | 第98-100页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第100-112页 |
| 6.4.1 LPS刺激下肠道细胞存活率 | 第100-101页 |
| 6.4.2 肠道细胞TLR4表达研究 | 第101-102页 |
| 6.4.3 LPS刺激下肠道细胞TLR4表达研究 | 第102-103页 |
| 6.4.4 LPS刺激下肠道细胞炎症因子mRNA表达研究 | 第103-108页 |
| 6.4.5 LPS刺激共培养肠道细胞TLR4表达研究 | 第108-110页 |
| 6.4.6 LPS刺激共培养肠道细胞炎症因子mRNA表达研究 | 第110-112页 |
| 6.5 本章小结 | 第112-114页 |
| 主要结论与展望 | 第114-117页 |
| 主要结论 | 第114-116页 |
| 展望 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-130页 |
| 本论文创新点 | 第130-131页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第131页 |
