| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 引言 | 第17-24页 |
| 1.1 肿瘤细胞缺氧及生物学影响 | 第18-19页 |
| 1.2 肿瘤干细胞与缺氧 | 第19-20页 |
| 1.3 Notch信号通路与非小细胞肺癌 | 第20-22页 |
| 1.4 Notch信号通路与肿瘤干细胞 | 第22页 |
| 1.5 缺氧、Notch信号通路和肿瘤干细胞 | 第22-24页 |
| 第2章 HIF-1α 稳定表达肺腺癌细胞株构建 | 第24-45页 |
| 2.1 材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 细胞、菌株和慢病毒载体系统 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂、耗材 | 第24-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.4 慢病毒载体 | 第27页 |
| 2.1.5 引物设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-38页 |
| 2.2.1 构建HIF-1α 过表达慢病毒载体 | 第28-34页 |
| 2.2.2 慢病毒载体介导HIF-1α 稳定表达肺腺癌细胞株构建 | 第34页 |
| 2.2.3 Western blotting检测蛋白的表达 | 第34-37页 |
| 2.2.4 MTT检测细胞活力 | 第37-38页 |
| 2.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第38页 |
| 2.2.6 统计学方法 | 第38页 |
| 2.3 结果 | 第38-42页 |
| 2.3.1 pHBLV-HIF-1α-RFP-Puro重组慢病毒质粒鉴定 | 第38-40页 |
| 2.3.2 慢病毒载体滴度测定 | 第40页 |
| 2.3.3 慢病毒载体介导HIF-1α 稳定表达肺腺癌细胞株筛选 | 第40-41页 |
| 2.3.4 HIF-1α 稳定表达肺腺癌细胞株鉴定 | 第41页 |
| 2.3.5 HIF-1α 稳定表达对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-45页 |
| 第3章 N1ICD稳定表达肺腺癌细胞株构建 | 第45-52页 |
| 3.1 材料 | 第45-46页 |
| 3.2 方法 | 第46页 |
| 3.3 结果 | 第46-50页 |
| 3.3.1 pHBLV-N1ICD-Zs Green-Puro重组慢病毒质粒鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 慢病毒载体滴度测定 | 第47页 |
| 3.3.3 慢病毒载体介导N1ICD稳定表达肺腺癌细胞株筛选 | 第47-48页 |
| 3.3.4 N1ICD稳定表达肺腺癌细胞株鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.5 N1ICD稳定表达对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第4章 HIF-1α 通过N1ICD诱导肺腺癌细胞获得肿瘤干细胞特性 | 第52-74页 |
| 4.1 材料 | 第52-55页 |
| 4.1.1 细胞、动物及慢病毒载体 | 第52-53页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第53页 |
| 4.1.3 主要实验试剂及耗材 | 第53-55页 |
| 4.2 方法 | 第55-60页 |
| 4.2.1 缺氧对肺腺癌细胞干细胞标志物表达的影响 | 第55-58页 |
| 4.2.2 HIF-1α 和N1ICD稳定表达对肺腺癌细胞干细胞标志物表达的影响 | 第58页 |
| 4.2.3 CCK-8 检测细胞活力 | 第58-59页 |
| 4.2.4 细胞成球实验 | 第59页 |
| 4.2.5 裸鼠成瘤实验 | 第59-60页 |
| 4.2.6 统计学方法 | 第60页 |
| 4.3 结果 | 第60-69页 |
| 4.3.1 缺氧通过Notch1信号通路诱导肺腺癌细胞干细胞标志物表达 | 第60-61页 |
| 4.3.2 HIF-1α 通过N1ICD诱导肺腺癌细胞干细胞标志物表达 | 第61-62页 |
| 4.3.3 N1ICD在HIF-1α 诱导肺腺癌细胞耐药中发挥重要作用 | 第62-64页 |
| 4.3.4 N1ICD参与HIF-1α 诱导的肺腺癌细胞自我更新 | 第64-65页 |
| 4.3.5 HIF-1α 通过N1ICD增强肺腺癌细胞体内成瘤能力 | 第65-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-74页 |
| 4.4.1 缺氧通过Notch1信号通路诱导肺腺癌细胞干细胞标志物表达 | 第69-70页 |
| 4.4.2 N1ICD在HIF-1α 诱导肺腺癌细胞耐药中发挥重要作用 | 第70-71页 |
| 4.4.3 HIF-1α 通过N1ICD增强肺腺癌细胞自我更新及体内成瘤能力 | 第71-74页 |
| 第5章 结论与展望 | 第74-75页 |
| 5.1 结论 | 第74页 |
| 5.2 展望 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第83-84页 |
| 综述 Notch signaling and non-small cell lung cancer | 第84-101页 |
| References | 第97-101页 |
